Abead–RNAP–DNA–bead dumb bell was c

Abead–RNAP–DNA–bead dumb bell was constructed by binding a small 0.5m m diameter polystyrene bead to a biotin tag located on the b 0 subunit of a stalled E. coli RNAP transcription elongation complex, and a larger 0.7m m-diameter bead to the downstream end of the DNA template using a digoxygenin antibody. Stalled complexes and avidin-coated 0.5m m-diameter polystyrene beads were prepared as described previously 12. Polyclonal anti-digoxigenin antibody was covalently attached to carboxylated 0.7m m diameter polystyrene beads (Bangs Labs) via an EDC/Sulfo–NHScoupled reaction. RNAP was stalled 29 base pairs after the T7A1 promoter on a template derivedfromtherpoB gene ofE.coli16.Each ofthetwobeads of thedumbbellwas held ina separate optical trap ,1 m m above the coverglass surface. Transcription along the DNA template was recorded by monitoring the position of the smaller bead (see below). All experiments were performed in transcription buffer (50mM HEPES, pH 8.0, 130mM KCl, 4mM MgCl2, 0.1mM EDTA, 0.1mM DTT, 20mgml21 heparin) in the presence of 1mM NTPs and an oxygen scavenging system24 at 22 ^ 58C. ITP was purchased from Sigma-Aldrich Company. GreA and GreB proteins were purified as described25

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Abead – RNAP – DNA-manik bell bodoh ini dibangun oleh mengikat kecil 0,5 m m diameter polystyrene manik-manik ke biotin tag terletak di subunit b 0 macet E. coli RNAP transkripsi elongasi kompleks, dan lebih besar 0.7m m-diameter manik-manik ke ujung hilir DNA template menggunakan sebuah antibodi digoxygenin. Kompleks terhenti dan berlapis avidin 0,5 m m-diameter manik-manik polystyrene disusun seperti yang dijelaskan sebelumnya 12. Antibodi poliklonal anti-digoxigenin berikatan kovalen dengan melekat pada carboxylated 0.7m m diameter polystyrene manik-manik (poni Labs) melalui reaksi EDC/Sulfo-NHScoupled. RNAP adalah pasang basis 29 terhenti setelah promotor T7A1 pada template derivedfromtherpoB gen ofE.coli16.Each ofthetwobeads dari thedumbbellwas diadakan perangkap optik terpisah ina, 1 m m di atas permukaan coverglass. Transkripsi sepanjang DNA template direkam oleh memantau posisi manik-manik yang lebih kecil (lihat bawah). Seluruh eksperimen dilaksanakan dalam transkripsi penyangga (50mM HEPES, pH 8.0, 130mM KCl, 4mM MgCl2, 0,1 mM EDTA, 0,1 mM DTT, 20mgml21 heparin) di hadapan 1 mM NTPs dan oksigen yang mengais-ngais system24 22 ^ 58 C. ITP dibeli dari perusahaan Sigma Aldrich. GreA dan GreB protein yang purified sebagai described25

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Abead-RNAP-DNA-manik bel bodoh dibangun dengan mengikat diameter 0.5mm polystyrene manik-manik kecil untuk tag biotin terletak di b 0 subunit dari E. macet coli RNAP transkripsi kompleks elongasi, dan yang lebih besar 0.7m m-diameter manik ke ujung hilir template DNA menggunakan antibodi digoxygenin. kompleks terhenti dan avidin-dilapisi 0.5m m-diameter manik polistiren dibuat seperti yang dijelaskan sebelumnya 12. poliklonal antibodi anti-digoksigenin itu kovalen melekat terkarboksilasi manik diameter 0.7mm polystyrene (Bangs Labs) melalui reaksi EDC / sulfo-NHScoupled. RNAP terhenti 29 pasangan basa setelah promotor T7A1 pada template derivedfromtherpoB ofthetwobeads gen ofE.coli16.Each dari thedumbbellwas diadakan ina perangkap optik yang terpisah, 1 mm di atas permukaan coverglass. Transkripsi sepanjang template DNA tercatat dengan memantau posisi manik kecil (lihat di bawah). Semua percobaan dilakukan di transkripsi penyangga (50mm HEPES, pH 8,0, 130mm KCl, 4mm MgCl2, 0.1mm EDTA, 0.1mm DTT, 20mgml21 heparin) di hadapan 1mM NTP dan oksigen system24 pembilasan pada 22 ^ 58C. ITP dibeli dari Sigma-Aldrich Company. Grea dan GreB protein yang dimurnikan sebagai described25