Expression and Purification of Reco

Expression and Purification of Recombinant Bovine Enteropeptidase— To facilitate the production of recombinant enteropeptidase, the membrane-spanning domain near the amino terminus was replaced with the human prothrombin signal peptide, allowing secretion into conditioned medium. A His6 tag was included after the signal peptidase cleavage site, enabling purification by chromatography on Ni21-nitrilotriacetic acid resin. Two forms of recombinant enteropeptidase were constructed (Fig. 1) to test the contribution of the heavy chain to macromolecular recognition. HL-BEK was truncated just before the first low density lipoprotein receptor-like domain and contains the remainder of the heavy chain and the light chain. L-BEK was truncated after the last cysteine residue of the macrophage scavenger receptor-like domain and contains mainly the light chain attached to a short carboxyl-terminal segment of the heavy chain. This preserves the disulfide bond predicted to link Cys-788 of the heavy chain to Cys-912 of the light chain, based on the organization of chymotrypsinogen and other homologous serine proteases that have disulfide linkages between the protease domain and the activation peptide (Fig. 1). The masses calculated from amino acid composition are 101 kDa for pro-HL-BEK and 36 kDa for pro-L-BEK.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Ekspresi dan pemurnian Bovine rekombinan Enteropeptidase — untuk memfasilitasi produksi enteropeptidase rekombinan, domain mencakup membran dekat ujung amino digantikan dengan manusia prothrombin peptida sinyal, memungkinkan sekresi menjadi ber-media. His6 tag adalah termasuk setelah sinyal peptidase pembelahan situs, memungkinkan pemurnian dengan kromatografi pada resin asam Ni21-nitrilotriacetic. Dua bentuk enteropeptidase rekombinan dibangun (Fig. 1) untuk menguji kontribusi rantai berat untuk pengakuan makromolekul. HL-BEK terpotong sebelum domain reseptor-seperti lipoprotein densitas rendah pertama dan berisi sisa rantai berat dan rantai ringan. L-BEK dipenggal setelah residu Sistein terakhir macrophage pemulung reseptor-seperti domain dan mengandung terutama jaringan cahaya yang melekat pada segmen carboxyl-terminal singkat rantai berat. Ini memelihara ikatan disulfida diperkirakan link Cys-788 rantai berat ke Cys-912 rantai ringan, berdasarkan organisasi chymotrypsinogen dan protease serin homolog lain yang memiliki disulfida keterkaitan antara protease domain dan aktivasi peptida (Fig. 1). Massa dihitung dari komposisi asam amino yang 101 kDa untuk pro-HL-BEK dan 36 kDa untuk pro-L-BEK.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Ekspresi dan Pemurnian rekombinan Bovine Enteropeptidase- Untuk memfasilitasi produksi enteropeptidase rekombinan, domain membran-spanning dekat ujung amino digantikan dengan peptida sinyal protrombin manusia, yang memungkinkan sekresi ke dalam medium AC. Tag Ilis6 termasuk setelah tempat pembelahan sinyal peptidase, memungkinkan pemurnian dengan kromatografi pada resin asam Ni21-nitrilotriacetic. Dua bentuk enteropeptidase rekombinan dibangun (Gambar. 1) untuk menguji kontribusi dari rantai berat untuk pengakuan makromolekul. HL-BEK terpotong sebelum domain reseptor-seperti kepadatan rendah lipoprotein pertama dan berisi sisa rantai berat dan rantai ringan. L-BEK terpotong setelah residu sistein terakhir dari domain reseptor-seperti makrofag pemulung dan berisi terutama rantai cahaya melekat pada segmen karboksil-terminal pendek dari rantai berat. Ini mempertahankan ikatan disulfida diprediksi menghubungkan Cys-788 dari rantai berat untuk Cys-912 rantai cahaya, berdasarkan organisasi chymotrypsinogen dan protease serin homolog lain yang memiliki keterkaitan disulfida antara domain protease dan aktivasi peptida (Gambar. 1). Massa dihitung dari komposisi asam amino 101 kDa untuk pro-HL-BEK dan 36 kDa untuk pro-L-BEK.