Study of In vitro Pollen Germinatio

Study of In vitro Pollen Germination, Pollen Tube Growth and Pollen Viability in Murraya koenigii L. (Rutaceae) Vineeta Chaudhary, Anita Rana, Seema Chauhan and Atul Prakash Department of Botany, School of Life Sciences, Dr. B. R. Ambedkar University, Agra-282 002 (U. P.), India e-mail: [e-mail]
A B S T R A C T In vitro pollen germination, pollen tube growth and pollen viability were carried out in Murraya koenigii L. Pollen germination started in 10% sucrose solution. Maximum percentage of germination 50% was recorded at Brewbaker and Kwack's medium and minimum percentage of germination 22.2% in 10% sucrose solution. Maximum pollen tube growth 277.5 ± 3.87 μm in 30% sucrose solution and minimum pollen tube length 68.4 ± 5.31 in 10% sucrose solution. The maximum pollen viability percentage 90.8% was shown by Alexander's stain; moderate 60% by FCR test and minimum 37.54% by % TTC test.
Key words: Murraya koenigii, In vitro pollen germination, Pollen tube growth, Pollen viability
Pollen germination and pollen tube growth are prerequisite for fertilization and seed development. Due to involvement of pistillate tissue in nature physiological and biochemical investigation on pollen germination and pollen tube growth in vivo are rather difficult. In vitro germination techniques have therefore been used extensively on a variety of pollen systems. Such studies have provided considerable information the physiology and biochemistry of pollen germination and pollen tube growth (Shivanna and Johri 1985, Heslop and Harrison 1987, Steer and Steer 1989). Pollen germination and pollen tube growth are generally divided into four phases; imbibition phases, lag phase, tube initiation phase and rapid tube elongation phase (Linskens and Kroh 1970). The time taken for different phases varies greatly, from species to species, depending on the type of reserved food material in the pollen and the external factors (Zaman 2006). Murraya koenigii L. commonly known as Kurrypatta, Mithaneem and Barsanga belongs to family Rutaceae is a handsome, short and shrubby tree of about 2-5 meters height. It is a native of India and is spread over 140 genera and 1300 species. In India, 16 genera and 75 species of family Rutaceae are recorded (Shukla and Misra 1997). The genus Murraya comprises of 11 species of shrub or small trees distributed in the tropics and sub-tropical regions (Swingle and Reece 1967). In India, only two species of Murraya i.e. exotica and koenigii are reported (Nair and Nayar 1997). Murraya koenigii L. is common found in Himachal Pradesh in the areas lying between 800-1450 meters above the sea level.
Murraya koenigii L. also has many important medicinal uses i e its leaves are used as an herb in Ayurvedic medicine, which are stated to be eaten raw for curing dysentery and the infusion of the washed leaves stops vomiting. The leaves are also studied as an antidiabetic, antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, anti-hypercholesterolemic hepatoprotective etc. (Arulselvan et al. 2006 2007). So Murraya koenigii L. is of considerable medicinal importance the purpose of the present work was to study in vitro pollen germination, pollen tube growth and pollen viability. MATERIALS AND METHODS Pollen germination studies were carried out in different concentration of sucrose solution (10, 15 and 20) and also in Brewbaker and Kwack's medium (Brewbaker and Kwack's 1963, Shivanna and Rangaswamy 1992). Pollen grains which have germinated and produced pollen tubes in the medium were recorded. Length of pollen tube in different concentrations was recorded after germination and percentage of pollen germination was calculated and average length of pollen tube was recorded. TTC was prepared in sucrose solution (1% TTC). A drop of TTC solution was taken on a microslide. Small amount of pollen grains were suspended and covered with a cover glass. After incubation period, pollen grains were observed under a microscope. For FCR test, pollen grains were mounted in FDA solution. A drop of sucrose and FDA mixture was taken on a micro slide. Sufficient amount of pollen grains were suspended, and covered with a cover slip and were observed under fluorescence microscope. For Alexander's stain test the slides were prepared by suspending the pollen grains in a drop of Alexander's stain and covered by a cover slip. After sometime the pollen grains were observed under the microscope. RESULTS AND DISCUSSION In vitro pollen germination
Research Journal of Agricultural Sciences 2010, 1(3): 249-251
249
In vitro pollen germination and pollen tube growth in Murraya koenigii L. is given in Table 1. Pollen germination and pollen tube growth as tested by Brewbaker and Kwack’s medium shows 50% pollen germination with 83.1 ± 0.294μm tube length (Fig A), while in different concentrations of sucrose solution i e 10, 15 and 30% showed 22.2, 33.3, 28.57% pollen germination with 68.4 ± 5.31, 101.2 ± 2.35 and 277.5 ± 3.87μm tube length, respectively (Figs B, C, D).
Table 1 Showing in vitro pollen germination as tested by Brewbaker and Kwack’s medium and different concentrations of sucrose solution
B. K. Medium
Concentrations of sucrose solution (%)
PG (%)
TL (m)
10
15
30
PG (%)
TL (m)
PG (%)
TL (m)
PG (%)
TL (m)
50
83.1 + 0.294
22.2
68.4 + 5.31
33.3
101.2 + 2.35
28.57
277.5 + 3.87
PG – pollen germination, TL – Tube length
Chaudhary et al.
250
Fig A-G Showing in vitro pollen germination, pollen tube growth and pollen viability in Murraya koeiigii L., Fig A Showing germinated and non-germinated pollen grains tested by B K medium, Fig B Showing germinated and non-germinated pollen grains tested by 10% sucrose solution, Fig C Showing germinated and non-germinated pollen grains tested by 15% sucrose solution, Fig D Showing germinated and non-germinated pollen grains tested by 30% sucrose solution, Fig E Showing viable and non-viable pollen grains tested by FCR test, Fig F Showing viable and non-viable pollen grains tested by 1% TTC test and Fig G Showing viable and non-viable pollen grains tested by Alexander’s test
Similar observations in Brewbaker and Kwack’s medium have been reported by Singh (2005) in Pyrostegia venusta, Sharma (2006) in Duranta repens and Sharma (2008) Aegle marmelos L. Kumari et al. (2009) have reported percentage of pollen germination increased with increase in concentration of sucrose in Trichosanthes dioica. Pollen viability Pollen viability as tested by FCR test, 1% TTC and Alexander’s stain are shown in Table 2. The viability is 60% as shown by FCR test. The viable pollen grains gave bright yellow fluorescence (Fig E). However, the pollen viability as tested by 1% TTC (in Tris HCl at pH 7.8) is 37.54%. The viable pollen grains showed red color due to accumulation of Formosan; where as non-viable pollen grains remain colorless (Fig F).
The pollen viability is 90.8% as tested by Alexander's stain. The viable pollen grains became purple and non viable pollen grains remained green (Fig G). Table 2 Showing pollen viability as tested by FCR, 1% TTC, Alexander’s Stain.
FCR
1 % TTC in TRIS HCL
ALEXANDER'S STAIN
60 %
37.54%
90.8%
Similar studies have been observed by Rathore (2008) in Murraya exotica, the pollen viability is 68% by Alexander's stain test, 61% by 1% TTC test and 78% by FCR test. Kumar (2008) reported 82.42% pollen viability as tested by Alexander's stain, 83.45% by 1% TTC test and 86.23 by FCR test in Citrus lemon. Sharma (2008) studied the pollen viability of Aegle marmelos and she reported 62.93% pollen viability by Alexander's stain, 28.91% by 1% TTC test and 57% by FCR test.
LITERATURE CITED
Arulselvan P, Senthil Kumar G P, Sathish Kumar D and Subramanion S. 2006. Antidiabetic effect of Murraya koenigii Leaves on streptozotocin induced diabetic rats. Pharmazie 61(10): 874-877
Arulselvan P and Subramanian S P. 2007. Beneficial effects of Murraya koenigii leaves on antioxidant defense system and ultra structural changes of pancreatic beta-cells in experimental diabetes in rats. Chem Biol Interaction 165(2): 155-164
Brewbaker J L and Kwack B H. 1963. The essential role of calcium ion in pollen germination and pollen tube growth. American Journal of Botany 50: 859-865
Heslop- Harrison J. 1987. Pollen germination and tube growth. Int. Rev. Cytology 107: 1-78
Kumar U. 2008. Reproductive biology of Citrus lemon L. (Rutaceae). M. Phil. Thesis., Dr. B. R. Ambedkar University, Agra
Kumari A, Rashmi K, Rajeev R and Arun K P. 2009. In vitro pollen germination, pollen tube growth and pollen viability in Trichosanthes diodica Roxb. Journal of Plant Reproductive Biology 1(2): 147-151
Linkens H F and Kroh M. 1970. Regulation of Pollen tube growth. In moscana AA. Monroy, A. (eds), current topic in developmental Biology 5, 89-113, Academic press, London
Nair K N and Nayar M P. 1997. Rutaceae: In the Flora of India (eds Hajra, P. K. et al.). Botanical Survey of India Calcutta 4: 259-408
Rathore M. 2008. Reproductive biology of Murraya exotica L. (Rutaceae). M. Phil. Thesis., Dr. B. R. Ambedkar University, Agra
Sharma D. 2006. Reproductive biology of Duranta repens L. (Verbenaceae). M. Phil. Thesis. Dr. B. R. Ambedkar University. Agra
Sharma L. 2008. Reproductive biology of Aegle marmelos L. (Rutaceae). M. Phil. Thesis., Dr. B. R. Ambedkar University, Agra
Shivanna K R and Johri B M. 1985. The angiosperm pollen structure and function, Wiley Eastern Ltd. Publisher, New Delhi
Shivanna K R and Rangaswami N S. 1992. Pollen biology: A laboratory manual. Narosa Publishing House, New Delhi
Shukla P and Misra S. 1997. An introduction to taxonomy of Angiosperms. Vikas Pub. House Pvt. Ltd, New Delhi. Pp. 466-470.
Singh S. 2005. Floral polymorphism and establishment of self incompatibility of Pyrostegia venusta. M. Phil. Thesis. Dr. B. R. Ambedkar University, Agra
Steer M W and Steer J M. 1989. Pollen tube tip growth. New Phytology, 111: 323-358
Swingle W T and Reece P C. 1967. The botany of Citrus and its wild relatives of the o

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Penelitian In vitro pengecambahan serbuk sari, serbuk sari tabung pertumbuhan dan serbuk sari viabilitas di Murraya koenigii L. (jerukan) Vineeta Chaudhary, Anita Rana, Seema Chauhan dan Departemen Prakash Atul Botany, School of Life Sciences, Dr. B. R. Ambedkar University, Agra-282 002 (U. P.), India e-mail: [e-mail] S T R C T In vitro serbuk sari pengecambahan, serbuk sari tabung pertumbuhan, dan serbuk sari viabilitas dilakukan di Murraya koenigii L. Pollen pengecambahan dimulai pada 10% sukrosa solusi. Persentase maksimum pengecambahan 50% tercatat di Brewbaker dan Kwack di media dan minimum persentase pengecambahan 22,2% pada 10% sukrosa solusi. Maksimum serbuk sari tabung pertumbuhan 277.5 ± 3.87 μm di 30% sukrosa solusi dan minimum serbuk sari tabung panjang 68.4 ± 5.31 di 10% sukrosa solusi. Serbuk sari maksimum viabilitas persentase 90.8% ditunjukkan oleh Alexander noda; moderat 60% dengan uji FCR dan minimum 37.54% % TTC uji.Kata kunci: Murraya koenigii, vitro serbuk sari pengecambahan serbuk sari tabung pertumbuhan, kelangsungan hidup serbuk sariSerbuk sari pengecambahan dan serbuk sari tabung pertumbuhan adalah prasyarat bagi pemupukan dan pengembangan benih. Karena keterlibatan pistillate jaringan dalam sifat fisiologis dan biokimia penyelidikan pada serbuk sari daya berkecambah dan serbuk sari tabung pertumbuhan di vivo yang agak sulit. In vitro pengecambahan teknik karena itu telah digunakan secara ekstensif di berbagai sistem serbuk sari. Studi tersebut telah memberikan informasi yang cukup fisiologi dan biokimia serbuk sari daya berkecambah dan serbuk sari tabung pertumbuhan (Shivanna dan Johri 1985, Heslop dan Harrison 1987, mengarahkan dan mengarahkan 1989). Serbuk sari pengecambahan dan serbuk sari tabung pertumbuhan umumnya dibagi menjadi empat tahap; imbibition fase, fase lag, tabung inisiasi fase dan fase elongasi cepat tube (Linskens dan Kroh 1970). Masa yang diambil untuk berbagai fase bervariasi sangat, dari spesies spesies, tergantung pada jenis makanan yang disediakan bahan serbuk sari dan faktor-faktor eksternal (Zaman 2006). Murraya koenigii L. dikenal sebagai Kurrypatta, Mithaneem, dan Barsanga milik keluarga jerukan adalah tampan, pendek dan semak pohon sekitar 2-5 meter tinggi. Hal ini berasal dari India dan tersebar di lebih dari 140 genera dan spesies 1300. Di India, 16 genera dan 75 jenis keluarga jerukan tercatat (Shukla dan Misra 1997). Genus Murraya terdiri dari 11 jenis semak atau pohon kecil yang tersebar di daerah tropis dan sub tropis wilayah (Swingle dan Reece 1967). Di India, dua spesies Murraya yaitu exotica dan koenigii yang dilaporkan (Nair dan Nayar 1997). Murraya koenigii L. umum ditemukan di Himachal Pradesh di daerah berbaring antara 800-1450 meter di atas permukaan laut.Murraya koenigii L. also has many important medicinal uses i e its leaves are used as an herb in Ayurvedic medicine, which are stated to be eaten raw for curing dysentery and the infusion of the washed leaves stops vomiting. The leaves are also studied as an antidiabetic, antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, anti-hypercholesterolemic hepatoprotective etc. (Arulselvan et al. 2006 2007). So Murraya koenigii L. is of considerable medicinal importance the purpose of the present work was to study in vitro pollen germination, pollen tube growth and pollen viability. MATERIALS AND METHODS Pollen germination studies were carried out in different concentration of sucrose solution (10, 15 and 20) and also in Brewbaker and Kwack's medium (Brewbaker and Kwack's 1963, Shivanna and Rangaswamy 1992). Pollen grains which have germinated and produced pollen tubes in the medium were recorded. Length of pollen tube in different concentrations was recorded after germination and percentage of pollen germination was calculated and average length of pollen tube was recorded. TTC was prepared in sucrose solution (1% TTC). A drop of TTC solution was taken on a microslide. Small amount of pollen grains were suspended and covered with a cover glass. After incubation period, pollen grains were observed under a microscope. For FCR test, pollen grains were mounted in FDA solution. A drop of sucrose and FDA mixture was taken on a micro slide. Sufficient amount of pollen grains were suspended, and covered with a cover slip and were observed under fluorescence microscope. For Alexander's stain test the slides were prepared by suspending the pollen grains in a drop of Alexander's stain and covered by a cover slip. After sometime the pollen grains were observed under the microscope. RESULTS AND DISCUSSION In vitro pollen germinationJurnal Penelitian Ilmu-ilmu pertanian 2010, 1(3): 249-251249Serbuk sari in vitro pengecambahan dan serbuk sari tabung pertumbuhan Murraya koenigii L. diberikan dalam tabel 1. Serbuk sari pengecambahan dan serbuk sari tabung pertumbuhan seperti yang diuji oleh Brewbaker dan Kwack di pengecambahan serbuk sari 50% menunjukkan sedang dengan 83.1 ± 0.294μm tabung panjang (Fig A), sementara dalam berbagai konsentrasi larutan sukrosa aku e 10, 15 dan 30% menunjukkan 22.2, 33,3, 28.57% pengecambahan serbuk sari dengan 68.4 ± 5.31, 101.2 ± 2,35 dan 277.5 ± 3.87μm tabung panjang, masing-masing (buah ara B, C, D).Tabel 1 menunjukkan serbuk sari secara in vitro pengecambahan seperti yang diuji oleh Brewbaker dan Kwack's menengah dan berbeda konsentrasi sukrosa solusiB. K. MediumKonsentrasi sukrosa solusi (%)PG (%)TL (m)101530PG (%)TL (m)PG (%)TL (m)PG (%)TL (m)5083,1 + 0.29422.268.4 + 5.3133,3101.2 + 2,3528.57277.5 + 3.87PG – pengecambahan serbuk sari, TL-panjang tabungChaudhary et al.250Ara A-G menampilkan pengecambahan serbuk sari secara in vitro, serbuk sari tabung pertumbuhan dan serbuk sari kelangsungan hidup di Murraya koeiigii L., ara menampilkan berkecambah dan bebas berkecambah butir serbuk sari diuji oleh B K media, ara B menampilkan berkecambah dan bebas-berkecambah butir serbuk sari diuji oleh 10% sukrosa solusi, ara C menampilkan berkecambah dan bebas berkecambah butir serbuk sari diuji oleh 15% solusi Sukrosa, ara D menampilkan berkecambah dan bebas-berkecambah butir serbuk sari diuji oleh 30% sukrosa solusi, Ara E menampilkan layak dan non-layak butir serbuk sari diuji oleh FCR test, ara F menampilkan layak dan non-layak butir serbuk sari diuji oleh 1% TTC tes dan ara G menampilkan layak dan non-layak butir serbuk sari yang diuji oleh Alexander tesPengamatan serupa di Brewbaker dan Kwack di media telah dilaporkan oleh Singh (2005) di Pyrostegia venusta, Sharma (2006) di Duranta repens dan Sharma (2008) Maja marmelos L. Kumari et al. (2009) telah melaporkan persentase serbuk sari pengecambahan meningkat dengan meningkatkan konsentrasi sukrosa dalam Trichosanthes dioica. Serbuk sari viabilitas serbuk sari kelangsungan hidup seperti yang diuji oleh FCR tes, 1% TTC dan Aleksander noda yang ditampilkan dalam tabel 2. Kelangsungan hidup adalah 60% seperti yang ditunjukkan oleh FCR tes. Biji-bijian serbuk sari yang layak memberikan fluoresensi kuning cerah (Fig E). Namun, serbuk sari kelangsungan hidup seperti yang diuji oleh 1% TTC (dalam Tris HCl pada pH 7,8) adalah 37.54%. Biji-bijian serbuk sari yang layak menunjukkan warna merah karena akumulasi Formosa; mana sebagai non-layak butir serbuk sari tetap berwarna (Fig F).Serbuk sari kelangsungan hidup adalah 90.8% seperti yang diuji oleh Alexander noda. Biji-bijian serbuk sari yang layak menjadi ungu dan non layak butir serbuk sari tetap hijau (Fig G). Tabel 2 menunjukkan serbuk sari kelangsungan hidup seperti yang diuji oleh FCR, 1% TTC, Aleksander noda.FCR1% TTC di TRIS HCLALEKSANDER NODA60%37.54%90.8%Penelitian serupa telah diamati oleh Rathore (2008) di Murraya Eksotika, kelangsungan hidup serbuk sari adalah 68% oleh Alexander noda tes, 61% oleh 1% TTC tes dan 78% oleh FCR tes. Kumar (2008) dilaporkan 82.42% serbuk sari kelangsungan hidup sebagai diuji oleh Alexander noda, 83.45% oleh 1% TTC tes dan 86.23 oleh FCR tes di jeruk lemon. Sharma (2008) mempelajari kelangsungan hidup serbuk sari Maja marmelos dan Dia melaporkan 62.93% serbuk sari kelangsungan hidup oleh Alexander noda, 28.91% oleh 1% TTC tes dan 57% oleh FCR tes.SASTRA DIKUTIPArulselvan P, Leave G Pohan, darireza Kumar D dan Subramanion S. 2006. Efek antidiabetes Murraya koenigii daun pada streptozotocin diinduksi diabetes tikus. Pharmazie 61(10): 874-877Arulselvan P dan Subramanian S P.bjr 2007. Efek menguntungkan dari Murraya koenigii meninggalkan pada sistem pertahanan antioksidan dan perubahan struktural ultra sel beta pankreas dalam eksperimental diabetes pada tikus. Chem Biol interaksi 165(2): 155-164Brewbaker J L dan Kwack B H. 1963. Peran penting ion kalsium dalam serbuk sari daya berkecambah dan serbuk sari tabung pertumbuhan. American Journal of Botany 50:859-865Heslop - Harrison J. 1987. Serbuk sari daya berkecambah dan tabung pertumbuhan. Wahyu Int. sitologi 107: 1-78Kumar U. 2008. Biologi reproduksi jeruk lemon L. (jerukan). M. Filipi tesis., Dr. B. R. Ambedkar University, AgraKumari A, Rashmi K, Rajeev R dan Arun K P. 2009. Serbuk sari in vitro pengecambahan, serbuk sari tabung pertumbuhan dan kelangsungan hidup serbuk sari Trichosanthes diodica Roxb. Jurnal tanaman biologi reproduksi 1 (2): 147-151Linkens H F dan Kroh M. 1970. Peraturan pertumbuhan tabung serbuk sari. Dalam moscana AA. Monroy, A. (eds), saat ini topik dalam perkembangan biologi 5, 89-113, Academic press, LondonNair K N dan Nayar M P. 1997. Jerukan: di Flora India (eds Hajra, P. K. et al.). Survei botani India Calcutta 4:259-408Rathore M. 2008. Biologi reproduksi Murraya exotica L. (jerukan). M. Filipi tesis., Dr. B. R. Ambedkar University, AgraSharma D. 2006. Biologi reproduksi Duranta repens L. (Verbenaceae). M. Tesis Filipi. Dr. B. R. Ambedkar Universitas. AgraSharma L. 2008. Biologi reproduksi Maja marmelos L. (jerukan). M. Filipi tesis., Dr. B. R. Ambedkar University, AgraShivanna K R dan Johri B M. 1985. Angiosperma serbuk sari struktur dan fungsi, Wiley Timur Ltd penerbit, New DelhiShivanna K R dan Rangaswami N S. 1992. Serbuk sari Biologi: laboratorium manual. Narosa penerbitan rumah, New DelhiShukla P dan Misra S. 1997. Pengenalan taksonomi i. Vikas Pub. Rumah Pvt. Ltd, New Delhi. Ms. 466-470.Singh S. 2005. Polimorfisme bunga dan pembentukan diri ketidakcocokan Pyrostegia venusta. M. Tesis Filipi. Dr. B. R. Ambedkar University, AgraSteer M W dan mengarahkan J M. 1989. Serbuk sari tabung tip pertumbuhan. Baru Phytology, 111: 323-358Swingle W T dan Reece P C. 1967. Botany jeruk dan kerabatnya liar o

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Studi in vitro Pollen perbenihan, Pertumbuhan Pollen Tube dan Pollen Viabilitas di Murraya koenigii L. (Rutaceae) Vineeta Chaudhary, Anita Rana, Seema Chauhan dan Atul Prakash Departemen Botani, School of Life Sciences, Dr. BR Ambedkar University, Agra-282 002 (UP), India e-mail: [e-mail]
A BSTRACT In vitro serbuk sari berkecambah, pertumbuhan tabung serbuk sari dan viabilitas polen dilakukan di Murraya koenigii L. Pollen perkecambahan dimulai dalam larutan sukrosa 10%. Persentase maksimum perkecambahan 50% tercatat di Brewbaker dan Kwack yang menengah dan minimum persentase perkecambahan 22,2% dalam larutan sukrosa 10%. Serbuk sari maksimum pertumbuhan tabung larutan sukrosa 277,5 ± 3,87 m di 30% dan minimum panjang tabung polen 68,4 ± 5,31 pada 10% larutan sukrosa. Persentase viabilitas serbuk sari maksimum 90,8% ditunjukkan oleh noda Alexander; moderat 60% dengan uji FCR dan minimum 37,54% dengan uji% TTC.
Kata kunci: Murraya koenigii, In vitro serbuk sari berkecambah, pertumbuhan tabung serbuk sari, viabilitas serbuk sari
Pollen perkecambahan dan pertumbuhan tabung serbuk sari prasyarat untuk pemupukan dan pengembangan benih. Karena keterlibatan jaringan betina di alam investigasi fisiologis dan biokimia pada serbuk sari perkecambahan dan pertumbuhan tabung polen in vivo agak sulit. Teknik in vitro perkecambahan karena itu telah digunakan secara luas pada berbagai sistem serbuk sari. Studi tersebut telah memberikan informasi yang cukup fisiologi dan biokimia dari serbuk sari perkecambahan dan pertumbuhan tabung polen (Shivanna dan Johri 1985, Heslop dan Harrison 1987, Steer dan Steer 1989). Pollen perkecambahan dan pertumbuhan tabung polen umumnya dibagi menjadi empat tahap; fase imbibisi, lag fase, fase inisiasi tabung dan cepat fase tabung elongasi (Linskens dan Kroh 1970). Waktu yang dibutuhkan untuk fase yang berbeda bervariasi, dari spesies ke spesies, tergantung pada jenis bahan makanan yang dipesan di serbuk sari dan faktor eksternal (Zaman 2006). Murraya koenigii L. umumnya dikenal sebagai Kurrypatta, Mithaneem dan Barsanga milik keluarga Rutaceae adalah pohon tampan, pendek dan semak sekitar 2-5 meter tingginya. Ini adalah penduduk asli India dan tersebar lebih dari 140 marga dan 1.300 spesies. Di India, 16 genera dan 75 spesies keluarga Rutaceae dicatat (Shukla dan Misra 1997). Genus Murraya terdiri dari 11 jenis semak atau pohon kecil yang tersebar di daerah tropis dan sub-tropis daerah (Swingle dan Reece 1967). Di India, hanya dua jenis yaitu Murraya exotica dan koenigii dilaporkan (Nair dan Nayar 1997). Murraya koenigii L. umum ditemukan di Himachal Pradesh di daerah yang terletak di antara 800-1450 meter di atas permukaan laut.
Murraya koenigii L. juga memiliki banyak kegunaan obat penting yaitu daunnya digunakan sebagai ramuan dalam pengobatan Ayurveda, yang dinyatakan dengan dimakan mentah untuk menyembuhkan disentri dan infus daun dicuci berhenti muntah. Daun juga dipelajari sebagai antidiabetes, antimikroba, anti-inflamasi, antioksidan, anti-hiperkolesterolemia hepatoprotektif dll (Arulselvan et al. 2006 2007). Jadi Murraya koenigii L. sangat penting obat yang cukup tujuan penelitian ini adalah untuk mempelajari in vitro perkecambahan serbuk sari, pertumbuhan tabung serbuk sari dan viabilitas polen. BAHAN DAN METODE Studi perkecambahan Pollen dilakukan dalam konsentrasi yang berbeda dari larutan sukrosa (10, 15 dan 20) dan juga dalam Brewbaker dan Kwack yang menengah (Brewbaker dan Kwack itu tahun 1963, Shivanna dan Rangaswamy 1992). Serbuk sari yang telah berkecambah dan menghasilkan tabung serbuk sari dalam medium dicatat. Panjang tabung serbuk sari dalam konsentrasi yang berbeda tercatat setelah perkecambahan dan persentase perkecambahan serbuk sari dihitung dan rata-rata lama tabung polen tercatat. TTC disiapkan dalam larutan sukrosa (1% TTC). Setetes larutan TTC diambil pada microslide a. Sedikit serbuk sari dihentikan dan ditutup dengan kaca penutup. Setelah masa inkubasi, serbuk sari diamati di bawah mikroskop. Untuk tes FCR, serbuk sari yang dipasang dalam larutan FDA. Setetes sukrosa dan campuran FDA diambil pada slide mikro. Jumlah yang cukup serbuk sari dihentikan, dan ditutup dengan kaca penutup dan diamati di bawah mikroskop fluoresensi. Untuk tes noda Alexander slide disusun oleh menangguhkan serbuk sari dalam setetes noda Alexander dan ditutupi oleh kaca penutup. Setelah beberapa waktu serbuk sari diamati di bawah mikroskop. HASIL DAN PEMBAHASAN Dalam vitro perkecambahan serbuk sari
Jurnal Penelitian Ilmu Pertanian 2010, 1 (3): 249-251
249
in vitro serbuk sari perkecambahan dan pertumbuhan tabung polen di Murraya koenigii L. diberikan dalam Tabel 1. Pollen perkecambahan dan pertumbuhan pollen tube sebagai diuji oleh Brewbaker dan menengah Kwack berisi 50% serbuk sari berkecambah dengan 83,1 ± panjang tabung 0.294μm (Gambar A), sedangkan dalam konsentrasi yang berbeda dari larutan sukrosa yaitu 10, 15 dan 30% menunjukkan 22,2, 33,3, 28,57% serbuk sari berkecambah dengan 68,4 ± 5,31, 101,2 ± 2.35 dan 277,5 ± 3.87μm panjang tabung, masing-masing (Gambar B, C, D).
Tabel 1 Menampilkan in vitro perkecambahan serbuk sari yang diuji oleh Brewbaker dan Kwack yang menengah dan berbagai konsentrasi larutan sukrosa
B. K. Sedang
Konsentrasi larutan sukrosa (%)
PG (%)
TL (m)
10
15
30
PG (%)
TL (m)
PG (%)
TL (m)
PG (%)
TL (m)
50
83,1 + 0,294
22,2
68,4 + 5,31
33,3
101,2 + 2.35
28,57
277,5 + 3,87
PG - serbuk sari berkecambah, TL - panjang tabung
. Chaudhary et al
250
Gambar AG Menampilkan in vitro serbuk sari berkecambah, pertumbuhan tabung serbuk sari dan viabilitas polen di Murraya koeiigii L., Gambar Sebuah Menampilkan berkecambah dan non-berkecambah serbuk sari diuji oleh media BK, Gambar B Menampilkan berkecambah dan serbuk sari non-berkecambah diuji dengan larutan sukrosa 10%, Gambar C Menampilkan berkecambah dan serbuk sari non-berkecambah diuji dengan larutan sukrosa 15%, Gambar D Menampilkan berkecambah dan serbuk sari non-berkecambah diuji oleh 30% larutan sukrosa, Gambar E Menampilkan layak dan non-layak serbuk sari diuji dengan uji FCR, Gambar F Menampilkan layak dan non-layak serbuk sari diuji dengan uji TTC 1% dan Gambar G Menampilkan layak dan non-layak serbuk sari diuji dengan uji Alexander
Pengamatan serupa di media Brewbaker dan Kwack ini telah dilaporkan oleh Singh (2005) di Pyrostegia venusta, Sharma (2006) di Duranta repens dan Sharma (2008) Maja L. Kumari et al. (2009) telah melaporkan persentase serbuk sari berkecambah meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sukrosa dalam Trichosanthes dioica. Viabilitas polen viabilitas serbuk sari yang diuji dengan uji FCR, 1% TTC dan noda Alexander ditunjukkan pada Tabel 2. kelangsungan adalah 60% seperti yang ditunjukkan oleh tes FCR. Serbuk sari yang layak memberikan fluoresensi kuning cerah (Gambar E). Namun, kelangsungan hidup serbuk sari yang diuji oleh 1% TTC (di Tris HCl pada pH 7,8) adalah 37,54%. Serbuk sari yang layak menunjukkan warna merah karena akumulasi Formosa; dimana serbuk sari non-layak tetap berwarna (Gambar F).
The viabilitas polen adalah 90,8% yang diuji oleh noda Alexander. Serbuk sari yang layak menjadi ungu dan serbuk sari non layak tetap hijau (Gambar G). Tabel 2 Menampilkan viabilitas polen yang diuji oleh FCR, 1% TTC, Alexander Stain.
FCR
1% TTC di TRIS HCL
ALEXANDER'S STAIN
60%
37,54%
90,8%
studi serupa telah diamati oleh Rathore (2008) di Murraya exotica, kelangsungan hidup serbuk sari 68% dengan uji noda Alexander, 61% dengan uji TTC 1% dan 78% dengan uji FCR. Kumar (2008) melaporkan 82,42% viabilitas polen yang diuji oleh noda Alexander, 83,45% dengan uji TTC 1% dan 86,23 dengan uji FCR di Citrus lemon. Sharma (2008) mempelajari kelayakan serbuk sari dari Maja dan dia melaporkan 62,93% viabilitas polen dengan noda Alexander, 28,91% dengan uji TTC 1% dan 57% oleh FCR tes.
PUSTAKA
Arulselvan P, Senthil Kumar GP, Sathish Kumar D dan Subramanion S. 2006. antidiabetes efek Murraya koenigii Daun pada streptozotocin diinduksi tikus diabetes. Pharmazie 61 (10): 874-877
Arulselvan P dan Subramanian S P. 2007. Efek menguntungkan dari Murraya koenigii daun pada sistem pertahanan antioksidan dan perubahan yang ultra struktur beta-sel pankreas pada diabetes eksperimental pada tikus. Chem Biol Interaksi 165 (2): 155-164
Brewbaker JL dan Kwack B H. 1963. Peran penting dari ion kalsium dalam serbuk sari perkecambahan dan pertumbuhan tabung serbuk sari. American Journal of Botany 50: 859-865
Heslop- Harrison J. 1987. Pollen perkecambahan dan pertumbuhan tabung. Int. Wahyu Sitologi 107: 1-78
Kumar U. 2008. biologi reproduksi dari Citrus lemon L. (Rutaceae). M. Phil. Skripsi., Dr. BR Ambedkar University, Agra
Kumari A, Rashmi K, Rajeev R dan Arun K P. 2009. Dalam vitro serbuk sari berkecambah, pertumbuhan tabung serbuk sari dan viabilitas polen di Trichosanthes diodica Roxb. Jurnal Tanaman Reproduksi Biologi 1 (2): 147-151
Linkens HF dan Kroh M. 1970. Peraturan pertumbuhan tabung serbuk sari. Dalam moscana AA. Monroy, A. (eds), topik saat ini dalam perkembangan Biologi 5, 89-113, tekan Akademik, London
Nair KN dan Nayar M P. 1997. Rutaceae: Di Flora of India (eds Hajra, PK et al.). Botanical Survey of India Calcutta 4: 259-408
Rathore M. 2008. biologi reproduksi dari Murraya exotica L. (Rutaceae). M. Phil. Skripsi., Dr. BR Ambedkar University, Agra
Sharma D. 2006. biologi reproduksi dari Duranta repens L. (Verbenaceae). M. Phil. Tugas Akhir. Dr. BR Ambedkar University. Agra
Sharma L. 2008. biologi reproduksi dari Maja L. (Rutaceae). M. Phil. . Skripsi, Dr. BR Ambedkar University, Agra
Shivanna KR dan Johri B M. 1985. Struktur angiosperma serbuk sari dan fungsi, Wiley Timur Ltd Penerbit, New Delhi
Shivanna KR dan Rangaswami N S. 1992. Pollen biologi: Sebuah panduan laboratorium. Narosa Publishing House, New Delhi
Shukla P dan Misra S. 1997. Pengantar taksonomi Angiospermae. Vikas Pub. Rumah Pvt. Ltd, New Delhi. Pp. 466-470.
Singh S. 2005. Floral polimorfisme dan pembentukan ketidakcocokan diri Pyrostegia venusta. M. Phil. Tugas Akhir. Dr. BR Ambedkar University, Agra
Steer MW dan Steer J M. 1989. Pollen pertumbuhan ujung tabung. New Phytology, 111: 323-358
Swingle WT dan Reece P C. 1967. botani Jeruk dan kerabat liar dari o