2. Bahan dan metode
2.1. Taksonomi sampel
Kedua segar (rambut atau jaringan) dan sampel museum yang digunakan dalam
penelitian ini (Tabel 1). Sepuluh dari sebelas spesies yang diakui
Herpestes dimasukkan. Spesies yang hilang adalah berkerah
luwak (Herpestes semitorquatus); meskipun beberapa upaya untuk
mendapatkan DNA dari sampel museum, kami tidak dapat memperoleh
urutan apapun untuk spesies ini. Analisis filogenetik berakar
oleh fossa (Cryptoprocta ferox) dan musang Malagasi (Fossa fossana),
dua perwakilan dari Eupleridae, yang Herpestidae ini
kerabat terdekat (Yoder et al., 2003).
2.2. Ekstraksi DNA dan sekuensing
Jumlah DNA genom diisolasi dari sampel biologis segar
berikut protokol berbasis CTAB (Winnepenninckx et al., 1993)
dan dari spesimen museum sampel dengan microkit QIAamp DNA
(Qiagen). Yu et al. (2006) protokol digunakan sebelum ekstraksi untuk
melembutkan dan pra-dicerna sampel. Dithiothreitol (DTT) juga
ditambahkan selama lisis jaringan untuk meningkatkan jumlah DNA yang dikumpulkan
selama ekstraksi.
Kami menggunakan primer Cytb dari Veron dkk. (2004) dan Gaubert
et al. (2004), dan primer ND2 dari Perez et al. (2006). Sebuah baru
primer internal yang ND2 (ND2 IntR1: 50
-TTATTATGGTTGATGCTGC-30
)
secara khusus dirancang untuk memperkuat pendek 50 akhir fragmen (ca.
250 bp) dari ekstrak spesimen museum. Lokus nuklir FGBi7,
yang memungkinkan resolusi filogeni Asia Viverridae
Sedang diterjemahkan, harap tunggu..