2.3.2. EscapinBecause ink caused av

2.3.2. Escapin
Because ink caused aversive responses in anemones,
we bioassayed the protein escapin, which is present in
ink but not opaline (Yang et al., 2005; Johnson et al.,
2006). First, we tested 50 μl of seawater, as a negative
control. If an anemone did not respond to seawater, then
50 μl of escapin,
L-lysine (which is a substrate for
escapin and is present in high concentrations in the
secretions (Yang et al., 2005)), escapin+
L-lysine and
ink (as a positive control) were tested in random order.
Because escapin tends to float when applied to anemone
tentacles, we solubilized it in 0.004 g/ml carboxymethylcellulose
(sodium salt, high viscosity, Sigma-Aldrich,
Inc., St. Louis, MO) in seawater to increase the density
of the stimulus. Thus, to control for effects of the carboxymethylcellulose,
all stimuli (except for ink) were
solubilized in this carboxymethylcellulose solution.
By solubilizing concentrated samples of escapin and
L-lysine in carboxymethylcellulose, we made solutions
of each at the natural concentrations at which they
occur in ink and opaline, respectively (
L-lysine occurs
at a much lower concentration in ink than opaline (Kicklighter et al., 2005; Johnson et al., 2006)). Thus,
escapin was tested at 0.028 mg/ml (Johnson et al., 2006)
and
L-lysine at 65 mM (Kicklighter et al., 2005). The
mixture of escapin and
L-lysine was tested on anemones
by pipetting 25 μl of each of these two solutions at the
same time so that they would mix as they were released
onto the tentacles. This release was accomplished by
attaching two 1-ml syringes side-by-side such that their
plungers were depressed simultaneously. We performed
the assay in this way to simulate as naturally as possible
the release of these stimuli. Upon attack by predators,
sea hares typically co-release ink and opaline into their
mantle cavity and then expel this mixture from their
siphon (Walters and Erickson, 1986; Johnson et al.,
2006). By this simulated natural release, escapin has
several seconds to oxidize its amino acid substrates and
produce its reaction products.
To address the following possibilities: (1) that a
longer reaction time was necessary for escapin to react
with its substrate to generate concentrations of products
sufficient to elicit behavioral effects, or (2) that
other components in opaline (including arginine or
other unidentified molecules) react with escapin to
form aversive products, we mixed 25 μleachof
escapin (solubilized in carboxymethylcellulose solution)
and opaline in a 1.5-ml microcentrifuge tube and
waited 2 min before applying to sea anemone tentacles.
This is sufficient time for escapin to completely oxidize
its amino acid substrates (Yang et al., 2005). Along with
escapin +opaline, the other stimuli included escapin
(mixed with carboxymethylcellulose), opaline and ink
(as a positive control), which were tested in random
order.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

2.3.2. escapinKarena tinta menimbulkan permusuhan tanggapan di Anemon,kami bioassayed protein escapin, yang merupakan hadir ditinta tetapi tidak opaline (Yang et al, 2005; Johnson et al.,2006). pertama, kami menguji 50 μl air laut, sebagai negatifkontrol. Jika Anemon tidak menanggapi air laut, kemudian50 μl dari escapin,L-lisin (yang merupakan substrat untukescapin dan hadir dalam konsentrasi tinggi dalamsekresi (Yang et al, 2005)), escapin +L-lisin dantinta (sebagai kontrol positif) diuji dalam urutan acak.Karena escapin cenderung mengapung bila diterapkan ke anemontentakel, kita solubilized di carboxymethylcellulose 0.004 g/ml(natrium garam, tinggi viskositas, Sigma Aldrich,Inc, St Louis, MO) dalam air laut untuk meningkatkan kepadatanstimulus. Dengan demikian, untuk kontrol untuk efek carboxymethylcellulose,itu semua rangsangan (kecuali untuk tinta)salubilized di carboxymethylcellulose solusi ini.Oleh solubilizing terkonsentrasi sampel escapin danL-lisin dalam carboxymethylcellulose, kami membuat solusimasing-masing pada konsentrasi alam di mana merekaterjadi dalam tinta dan opaline, masing-masing)L-lisin terjadipada konsentrasi yang lebih rendah dalam tinta daripada opaline (Kicklighter et al., 2005; Johnson et al., 2006)). Dengan demikian,escapin diuji di 0.028 mg/ml (Johnson et al., 2006)danL-lisin di 65 mM (Kicklighter et al, 2005). Thecampuran escapin danL-lisin diuji pada Anemonoleh pipetting 25 μl masing-masing solusi ini dua jamsaat sama sehingga mereka akan campuran sebagai mereka dibebaskanke tentakel. Rilis ini dilakukan olehmelampirkan 2 syringe berisi 1 ml sisi-by-side sedemikian rupa sehingga merekaplungers yang tertekan secara bersamaan. Kami melakukanassay dalam cara ini untuk mensimulasikan secara alami sebanyak mungkinrilis ini rangsangan. Berdasarkan serangan oleh predator,laut hares biasanya bersama-sama merilis tinta dan opaline ke merekamantel rongga dan kemudian mengusir campuran ini dari merekasiphon (Walters dan Erickson, 1986; Johnson et al.,2006). oleh rilis alami ini simulasi, escapin telahbeberapa detik untuk mengoksidasi asam amino yang substrat danmenghasilkan produk reaksi.Untuk mengatasi kemungkinan berikut: (1) yanglama waktu reaksi adalah diperlukan untuk escapin bereaksidengan substrat yang menghasilkan konsentrasi produkcukup untuk menimbulkan efek perilaku, atau (2) yangkomponen lain dalam opaline (termasuk arginin ataumolekul-molekul lain tak dikenal) bereaksi dengan escapin untukbentuk permusuhan produk, kami dicampur 25 μleachofescapin (salubilized dalam carboxymethylcellulose solusi)dan opaline dalam tabung 1,5-ml microcentrifuge danmenunggu 2 menit sebelum menerapkan ke tentakel Anemon laut.Ini adalah waktu yang cukup untuk escapin untuk benar-benar mengoksidasiasam amino yang substrat (Yang et al, 2005). Bersama denganescapin + opaline, rangsangan lainnya termasuk escapin(dicampur dengan carboxymethylcellulose), opaline dan tinta(sebagai kontrol positif), yang diuji di acakurutan.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

2.3.2. Escapin
Karena tinta menyebabkan respon permusuhan di anemon,
kami bioassayed yang escapin protein, yang hadir dalam
tinta tapi tidak opaline (Yang et al, 2005;.. Johnson et al,
2006). Pertama, kita diuji 50 ml air laut, sebagai negatif
kontrol. Jika anemon tidak menanggapi air laut, kemudian
50 ml escapin,
L-lisin (yang merupakan substrat untuk
escapin dan hadir dalam konsentrasi tinggi dalam
sekresi (Yang et al., 2005)), escapin +
L-lisin dan
tinta (sebagai kontrol positif) diuji secara acak.
Karena escapin cenderung mengapung bila diterapkan anemon
tentakel, kami dilarutkan dalam 0,004 g / ml karboksimetilselulosa
(garam natrium, viskositas tinggi, Sigma-Aldrich,
Inc, St. Louis, MO) dalam air laut untuk meningkatkan densitas
dari stimulus. Dengan demikian, untuk mengontrol efek dari karboksimetilselulosa tersebut,
semua rangsangan (kecuali untuk tinta) yang
dilarutkan dalam larutan karboksimetilselulosa ini.
Dengan pelarut sampel terkonsentrasi dari escapin dan
L-lisin dalam karboksimetilselulosa, kami membuat solusi
dari masing-masing pada konsentrasi alami di mana mereka
terjadi tinta dan opaline, masing-masing (
L-lisin terjadi
pada konsentrasi yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan tinta opaline (Kicklighter et al, 2005;.. Johnson et al, 2006)). Dengan demikian,
escapin diuji di 0.028 mg / ml (Johnson et al., 2006)
dan
L-lisin pada 65 mM (Kicklighter et al., 2005). The
campuran escapin dan
L-lisin diuji pada anemon
dengan pipetting 25 ml masing-masing dua solusi pada
saat yang sama sehingga mereka akan bercampur saat mereka dibebaskan
ke tentakel. Rilis ini dicapai dengan
melampirkan dua jarum suntik 1 ml sisi-by-side sehingga mereka
piston mengalami depresi secara bersamaan. Kami melakukan
uji dengan cara ini untuk mensimulasikan secara alami mungkin
pelepasan rangsangan tersebut. Setelah serangan predator,
laut kelinci biasanya co-release tinta dan opaline ke mereka
rongga mantel dan kemudian mengusir campuran ini dari mereka
siphon (Walters dan Erickson, 1986; Johnson et al,.
2006). Dengan rilis alami simulasi ini, escapin memiliki
beberapa detik untuk mengoksidasi substrat asam amino dan
menghasilkan produk reaksinya.
Untuk mengatasi kemungkinan sebagai berikut: (1) bahwa
waktu reaksi yang lebih lama diperlukan untuk escapin bereaksi
dengan substrat untuk menghasilkan konsentrasi produk
cukup untuk menimbulkan efek perilaku, atau (2) bahwa
komponen lain dalam opaline (termasuk arginin atau
molekul tak dikenal lainnya) bereaksi dengan escapin untuk
membentuk produk permusuhan, kami dicampur 25 μleachof
escapin (dilarutkan dalam larutan karboksimetilselulosa)
dan opaline dalam microcentrifuge 1,5 ml tabung dan
menunggu 2 menit sebelum mendaftar ke tentakel anemon laut.
Ini adalah waktu yang cukup untuk escapin sepenuhnya mengoksidasi
substrat asam amino yang (Yang et al., 2005). Seiring dengan
escapin + opaline, rangsangan lain yang termasuk escapin
(dicampur dengan karboksimetilselulosa), opaline dan tinta
(sebagai kontrol positif), yang diuji secara acak
order.