the methods of Dahal et al. (1997)

the methods of Dahal et al. (1997) and Cooter et al.
(2000) with modifications of the rice variety and age of
seedling to feed the leafhopper. The susceptible cultivar
of Cisadane was chosen to feed of the leafhopper. One
week-old seedlings of Cisadane were planted in a plastic
boxs 3x7x14 cm in size and then were placed on the
rearing box 40x40x40 cm in size for rearing of
N. virescens.
Identification of N. virescens Active Transmitters.
Identification of N. virescens active transmitters was
carried out through procedure of transmission test
according to Dahal et al. (1997). Adult males of
leafhopper were infested on rice that has been infected
by tungro virus for three days to take feeding acquisition.
After acquisition feeding, the leafhopper was infested
individually on healthy seedlings for inoculation feeding
for three days. After inoculation feeding, the seedling
was planted individually on pots 6 cm of diameter.
The N.virescens active transmitters were
determined by ditermining their ability to transmit tungro
virus after acquisition feeding, according to the criteria
of Ling (1972). The ability of N. virescens to transmit
the virus was based on criteria of the Standard Evaluation
System (SES), with a score of 3, namely shortening of
1-10% of the top leaf, abnormal seedling by shortened
growth, but no yellowish leaf (IRRI, 1996). The
N. virescens active transmitters that have been
identified were stored in 90% alcohol and used as a
sample of DNA extraction.
DNA Extraction. Procedure of RAPD-PCR was
conducted through three main steps, namely DNA
extraction, PCR amplification and DNA visualization.
The first step of RAPD-PCR was the preparation of
the target DNA template. The N. virescens active
transmitter male was used to isolate DNA template.
Males N. virescens were used as sample because of
their smaller body and lower protein contents, so did
not interfere in PCR amplification. Genome DNA initially
was extracted by modified method from Hidayat et al.
(1996). Homogenizaton of three green leafhoppers,
N. virescens active transmitter carried out in a
microcentrifuge tube using a plastic micro-pestle. Whole
insects were macerated in 125 µl of extraction buffer
(2% CTAB, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM TrisHCl
pH 8, 0) and incubated at 60 °C for 30 min. Then
was added one volume of chloroform: isoamyl alcohol
(24:1) and homogenized by vortex. Subsequently, the
samples were centrifuged for 5 min at 800 rpm.
Supernatant was transferred to a new tube, were added
10 µl of 3 M NaOAc and 250 µl of absolute ethanol,
than the supernatants was incubated at -20 °C for 30
min and centrifuged at 11,500 rpm for 15 min. After
centrifugation, supernatant was discarded and the pellet
was washed with 200 ml of 0.2 M solution of ammonium
acetate in 70% ethanol and centrifuged at 11,500 rpm
for 2 min. Ethanol was discarded and the pellet was
dried in a vacuum pump for 10 min. Pellet was then
resuspended in 10 ml of sterile water and stored at
-20 °C. DNA concentration of each sample was
quantified by using spectrophotometer, while the quality
of DNA was checked by electrophoresis on 1.4%
agarose.
DNA Amplification. The RAPD-PCR amplification
was a step to led of DNA bands from identified samples.
RAPD-PCR amplification step was to lead DNA band
of the sample identified. Amplification of DNA template
of N. virescens was performed as described by Hidayat
et al., (1996). Three selected random primers, namely
OPB 01 (GTT TCG CTC C); OPB10 (CTG CTG GGA
C), and OPC08 (GGT ACC TGG G), ware used to
amplify DNA template. All of the primers were
commonly used to amplify of insects (Loxdale & Lushai,
1998). PCR was carried out in 25 µl volume reaction
mixture. The reaction mixture contained 18.8 µl H2O,
2.5 µl Buffer MgCl2, 0.5 µl dNTP mix 10 mM, 1µl
random primer 10 µM, 0.2 µl Taq DNA polymeration
5 u/µl, and 2 µl DNA template. Tubes containing reaction
mixture were processed into a PCR Thermal Cycler
machine. Amplification reactions were conducted by
using a GenAmp PCR 9700 thermo cycler programmed
to run the following procedure: an initial denaturation 1
cycle at 95 °C for 5 min; 45 cycles consisting each of a
denaturation step at 94°C for 1 min; an annealing step
at 36 °C for 1 min; extension at 72 °C for 2 min and
final elongation/extension at 72 °C for 5 min. The
products of each PCR were visualized in running
electrophoresis in 1.4% agarose gels at 60 V for 7 hr in
TAE buffer. The gels were stained using ethidium
bromide. The results were observed in a
transillumination UV light (UV) and photodocumented.
Data Analysis. Data analysis was conducted on the
difference variability of N. virescens came from
endemic and non-endemic areas studied. Gel
electrophoresis products, after being photographed were
analyzed for the presence of visual criteria. DNA bands
profile of N. virescens active transmitter from endemic
and non endemic were coded binary by visual criteria
of presence (1) and absence (0) band for each fragment
sizes found in different primary, but only strong and
consistent bands considered. The banding pattern

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

metode Dahal et al. (1997) dan Cooter et al.(2000) dengan modifikasi varietas padi dan usiabibit untuk pakan leafhopper. Budidaya rentandari Cisadane dipilih untuk memberi makan dari leafhopper. Salah satubibit seminggu Cisadane ditanam dalam plastikkotak 3 x 7 x 14 cm dalam ukuran dan kemudian ditempatkan padamembesarkan kotak 40 x 40 x 40 cm dalam ukuran untuk pemeliharaanN. virescens.Identifikasi N. virescens aktif pemancar.Identifikasi N. virescens pemancar aktif adalahdilakukan melalui prosedur pengujian transmisiMenurut Dahal et al. (1997). Laki-laki dewasa darileafhopper yang penuh beras yang telah terinfeksioleh tungro virus selama tiga hari untuk mengambil makan akuisisi.Setelah akuisisi makan, leafhopper penuhsecara individual pada bibit yang sehat untuk makan inokulasiselama tiga hari. Setelah makan, inokulasi bibitditanam secara individual pada pot 6 cm diameter.N.virescens yang sedang aktif pemancarditentukan oleh ditermining kemampuan mereka untuk mengirimkan tungrovirus setelah akuisisi makan, menurut kriteriaLing (1972). Kemampuan N. virescens untuk mengirimkanvirus ini didasarkan pada kriteria evaluasi standarSistem (SES), dengan Skor 3, yaitu memperpendek dari1-10% teratas daun, abnormal bibit oleh disingkatpertumbuhan, tetapi tidak ada daun kekuningan (IRRI, 1996). TheN. virescens aktif pemancar yang telahdiidentifikasi disimpan dalam 90% alkohol dan digunakan sebagaicontoh DNA ekstraksi.Isolasi DNA. Prosedur PCR amplifikasi acak polimorfisme DNAdilakukan melalui tiga langkah utama, yaitu DNAekstraksi, PCR amplifikasi dan DNA visualisasi.Langkah pertama dari PCR amplifikasi acak polimorfisme DNA adalah persiapantarget DNA template. Virescens N. yang aktifLaki-laki pemancar digunakan untuk mengisolasi DNA template.Laki-laki N. virescens digunakan sebagai sampel karenatubuh yang lebih kecil dan isi protein yang lebih rendah, mereka begitu pulatidak mengganggu dalam PCR amplifikasi. Genom DNA awalnyadiambil oleh metode diubah dari Hidayat et al.(1996). Homogenizaton dari tiga wereng hijau,N. virescens aktif pemancar dilakukan diMicrocentrifuge tabung menggunakan plastik mikro-alu. Seluruhserangga yang dimaserasi di 125 μL ekstraksi buffer(CTAB 2%, NaCl M 1.4, 20 mM EDTA, 100 mM TrisHClpH 8, 0) dan diinkubasi di 60 ° C selama 30 menit kemudian cycling kemudianditambahkan satu volume kloroform: isoamyl alkohol(24:1) dan disamakan oleh vortex. Selanjutnya,sampel yang disentrifugasi selama 5 menit pada 800 rpm.Supernatant dipindahkan ke tabung baru, ditambahkan10 μL dari 3 M NaOAc dan 250 μL etanol absolut,daripada supernatants diinkubasi pada 20 ° C selama 30min dan disentrifugasi pada 11.500 rpm 15 menit kemudian setelahsentrifugasi, supernatant dibuang dan peletdicuci dengan 200 ml larutan 0.2 M amoniumasetat dalam 70% etanol dan disentrifugasi pada 11.500 rpmuntuk 2 min. etanol dibuang dan pelet adalahkering di pompa vakum untuk 10menit Pellet kemudianresuspended dalam 10 ml air steril dan disimpan di-20 ° C. Adalah DNA konsentrasi setiap sampeldiukur dengan menggunakan spectrophotometer, sementara kualitasDNA telah diperiksa oleh Elektroforesis pada 1,4%Agarose.Amplifikasi DNA. Amplifikasi acak polimorfisme DNA-PCR amplifikasipada langkah untuk dipimpin DNA band dari sampel diidentifikasi.Amplifikasi acak polimorfisme DNA-PCR amplifikasi langkah adalah untuk membawa DNA bandsampel diidentifikasi. Amplifikasi DNA templaten virescens dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Hidayatet al., (1996). Tiga dipilih acak primers, yaituOPB 01 (GTT TCG CTC C); OPB10 (CTG CTG GGAC), dan OPC08 (GGT ACC TGG G), ware digunakan untukmemperkuat DNA template. Semua yang primersumumnya digunakan untuk memperkuat serangga (Loxdale & Lushai,1998). PCR dilaksanakan dalam 25 μL volume reaksicampuran. Campuran reaksi terkandung 18.8 μL H2O,2.5 μL buffer MgCl2, 0.5 μL dNTP campuran 10 mM, 1µlacak primer 10 µM, 0.2 μL Taq DNA polymerationu/μL 5, dan 2 μL DNA template. Tabung yang mengandung reaksicampuran yang diolah menjadi pengendara sepeda termal PCRmesin. Amplifikasi reaksi dilakukan olehmenggunakan pengendara sepeda thermo GenAmp PCR 9700 yang diprogramuntuk menjalankan prosedur berikut: denaturasi awal 1siklus di 95 ° C selama 5 menit; 45 siklus terdiri masing-masingDenaturasi langkah pada 94° C selama 1 menit; langkah Anildi 36 ° C selama 1 menit; ekstensi di 72 ° C selama 2 menit danakhir elongasi renovasi pada 72 ° C selama 5 menit.Produk PCR setiap yang dibayangkan dalam menjalankanElektroforesis di 1,4% agarose gel 60 V untuk 7 hrTAE buffer. Gel yang bernoda menggunakan ethidiumbromida. Hasil yang diamati padacahaya transillumination UV (UV) dan photodocumented.Analisis data. Analisis data dilaksanakan padaperbedaan variabilitas N. virescens datang darimempelajari daerah endemik dan bebas-endemik. GelElektroforesis produk, setelah difoto itudianalisis untuk kehadiran visual kriteria. DNA bandProfil N. virescens pemancar aktif dari penyebarandan penyebaran bebas kode biner dengan kriteria visualkehadiran (1) dan ketiadaan (0) band untuk setiap fragmenukuran yang ditemukan dalam dasar yang berbeda, tetapi hanya kuat danband konsisten dianggap. Pola banding

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

metode Dahal et al. (1997) dan Cooter et al.
(2000) dengan modifikasi dari varietas padi dan umur
bibit untuk memberi makan wereng tersebut. Kultivar rentan
Cisadane dipilih untuk memberi makan wereng tersebut. Satu
bibit minggu-lama Cisadane ditanam di plastik
boxs 3x7x14 cm dan kemudian ditempatkan pada
kotak pemeliharaan 40x40x40 cm untuk membesarkan
N. virescens.
Identifikasi N. virescens Pemancar aktif.
Identifikasi N. virescens pemancar aktif yang
dilakukan melalui prosedur pengujian transmisi
menurut Dahal et al. (1997). Laki-laki dewasa dari
wereng yang penuh beras yang telah terinfeksi
oleh virus tungro selama tiga hari untuk mengambil makan akuisisi.
Setelah makan akuisisi, wereng itu penuh
individual pada bibit yang sehat untuk inokulasi makan
selama tiga hari. Setelah makan inokulasi, bibit
ditanam secara individual pada pot 6 cm diameter.
The N.virescens pemancar aktif yang
ditentukan oleh ditermining kemampuan mereka untuk mengirimkan tungro
virus setelah makan akuisisi, sesuai dengan kriteria
dari Ling (1972). Kemampuan N. virescens untuk mengirimkan
virus didasarkan pada kriteria Evaluasi Standar
System (SES), dengan skor 3, yaitu memperpendek dari
1-10% dari daun atas, bibit yang abnormal oleh dipersingkat
pertumbuhan, tapi tidak ada kekuningan daun (IRRI, 1996). The
N. virescens pemancar aktif yang telah
diidentifikasi disimpan di 90% alkohol dan digunakan sebagai
sampel DNA ekstraksi.
Ekstraksi DNA. Prosedur RAPD-PCR
dilakukan melalui tiga langkah utama, yaitu DNA
ekstraksi, amplifikasi PCR dan visualisasi DNA.
Langkah pertama RAPD-PCR adalah penyusunan
template DNA target. N. virescens aktif
pemancar laki-laki digunakan untuk mengisolasi DNA template.
Pria N. virescens yang digunakan sebagai sampel karena
tubuh mereka lebih kecil dan isi protein rendah, jadi
tidak ikut campur dalam PCR amplifikasi. Genom DNA awalnya
diekstraksi dengan metode modifikasi dari Hidayat et al.
(1996). Homogenizaton tiga wereng hijau,
N. virescens pemancar aktif dilakukan dalam
tabung microcentrifuge menggunakan micro-alu plastik. Seluruh
serangga dimaserasi dalam 125 ml buffer ekstraksi
(2% CTAB, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM TrisHCl
pH 8, 0) dan diinkubasi pada 60 ° C selama 30 menit. Kemudian
ditambahkan satu volume kloroform: isoamil alkohol
(24: 1) dan dihomogenisasi dengan vortex. Selanjutnya,
sampel disentrifugasi selama 5 menit pada 800 rpm.
Supernatan dipindahkan ke tabung baru, ditambahkan
10 ml 3 M NaOAc dan 250 ml etanol absolut,
dari supernatan diinkubasi pada -20 ° C selama 30
menit dan disentrifugasi pada 11.500 rpm selama 15 menit. Setelah
sentrifugasi, supernatan dibuang dan pelet
dicuci dengan 200 ml 0,2 M larutan amonium
asetat dalam etanol 70% dan disentrifugasi pada 11.500 rpm
selama 2 menit. Etanol dibuang dan pelet itu
dikeringkan dalam pompa vakum selama 10 menit. Pelet kemudian
resuspended dalam 10 ml air steril dan disimpan pada
-20 ° C. Konsentrasi DNA dari masing-masing sampel
diukur dengan menggunakan spektrofotometer, sedangkan kualitas
DNA diperiksa dengan elektroforesis pada 1,4%
agarose.
DNA amplifikasi. The RAPD-PCR amplifikasi
adalah langkah untuk memimpin band DNA dari sampel diidentifikasi.
RAPD-PCR amplifikasi langkah adalah memimpin pita DNA
dari sampel diidentifikasi. Amplifikasi template DNA
dari N. virescens dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Hidayat
et al., (1996). Tiga primer acak yang dipilih, yaitu
OPB 01 (GTT TCG CTC C); OPB10 (CTG CTG GGA
C), dan OPC08 (GGT ACC TGG G), barang yang digunakan untuk
memperkuat DNA template. Semua primer yang
umum digunakan untuk memperkuat serangga (Loxdale & Lushai,
1998). PCR dilakukan di 25 ml reaksi Volume
campuran. Campuran reaksi yang terkandung 18,8 H2O ml,
2,5 ml Buffer MgCl2, 0,5 ml campuran dNTP 10 mM, 1μl
acak primer 10 pM, 0,2 ml Taq DNA polimerisasi
5 u / ml, dan 2 ml DNA template. Tabung yang mengandung reaksi
campuran yang diolah menjadi PCR Cycler Thermal
mesin. Reaksi amplifikasi dilakukan dengan
menggunakan GenAmp PCR 9700 thermo pengendara sepeda diprogram
untuk menjalankan prosedur berikut: sebuah awal denaturasi 1
siklus pada 95 ° C selama 5 menit; 45 siklus yang terdiri dari masing-masing
langkah denaturasi pada 94 ° C selama 1 menit; langkah anil
pada 36 ° C selama 1 menit; ekstensi pada 72 ° C selama 2 menit dan
akhir perpanjangan / ekstensi pada 72 ° C selama 5 menit. The
produk masing-masing PCR divisualisasikan dalam menjalankan
elektroforesis di 1,4% agarose gel pada 60 V selama 7 jam di
TAE penyangga. Gel yang bernoda menggunakan ethidium
bromide. Hasil yang diamati dalam
cahaya transillumination UV (UV) dan photodocumented.
Analisis Data. Analisis data dilakukan pada
variabilitas perbedaan virescens N. berasal dari
daerah endemik dan non-endemik dipelajari. Gel
elektroforesis produk, setelah difoto sedang
dianalisis untuk kehadiran kriteria visual. Pita DNA
profil dari N. virescens pemancar aktif dari endemik
dan non endemik diberi kode biner dengan kriteria visual yang
kehadiran (1) dan tidak adanya (0) band untuk setiap fragmen
ukuran ditemukan di dasar yang berbeda, tetapi hanya kuat dan
band yang konsisten dianggap. Pola pita