Culturing and Molecular TypingAll s

Culturing and Molecular Typing

All specimens were processed according to standard methods.
Tuberculous-like animal lesions were dissected and manually
homogenized, then decontaminated with 4% NaOH for
15 min and centrifuged at 3,000 rpm for 15 min. The sediment
was neutralized with 2 N HCl using phenol red as an
indicator and inoculated on three different media slants: Two
Lo¨wenstein–Jensen (LJ) media supplemented either with
glycerol or pyruvate, and Middlebrook 7H11 media (Berg
et al. 2009). The slants were incubated at 37C for 8 weeks and
examined daily for the first week and then weekly for the presence of mycobacterial colonies. Cultures were considered
negative if no visible growth was detected after 8 weeks of
incubation. Microscopic examination of cultures using the
Ziehl–Neelsen staining method was performed to detect the presence of acid-fast-positive bacilli (AFB) (Roberts et al.
1991). AFB-positive cultures were prepared as 20% glycerol
stocks and stored at -80C as reference.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Kultur dan Molekuler Mengetik Semua spesimen diproses sesuai dengan metode standar. Tuberkulosis seperti lesi hewan yang dibedah dan manual dihomogenisasi, kemudian didekontaminasi dengan 4% NaOH untuk 15 menit dan disentrifugasi pada 3.000 rpm selama 15 menit. Sedimen dinetralkan dengan 2 N HCl menggunakan fenol merah sebagai indikator dan diinokulasi pada tiga miring media yang berbeda: Dua Lowenstein-Jensen (LJ) Media dilengkapi baik dengan gliserol atau piruvat, dan media Middlebrook 7H11 (Berg et al 2009.) . The miring diinkubasi pada 37? C selama 8 minggu dan diperiksa setiap hari selama minggu pertama dan kemudian mingguan untuk kehadiran koloni mikobakteri. Budaya dianggap negatif jika tidak ada pertumbuhan terlihat terdeteksi setelah 8 minggu inkubasi. Pemeriksaan mikroskopis dari budaya menggunakan metode pewarnaan Ziehl Neelsen-dilakukan untuk mendeteksi keberadaan basil tahan asam-positif (AFB) (Roberts et al. 1991). Budaya AFB-positif disiapkan sebagai 20% gliserol saham dan disimpan pada -80? C sebagai acuan.