of the enzyme solution incubated at

of the enzyme solution incubated at 0°C, rather than at the temperature used to measure stability. The
n
o values of the samples
incubated at higher temperatures are compared with
n
o for the sample held at 0°C.
Evidence for pH instability can also be obtained from plots of
n
o versus pH. The pHn
o
curve will be skewed below or above the
pH
optimum, if there is instability (Fig. 15). This is the explanation for the skewed pH versus
n
o
curves for pepsin and alkaline
phosphatase
in Figure 13 and the pH versus
n
o
curve E in Figure 14a for alkaline phosphatase.
A third way to determine enzyme instability is to determine product formation (at different pH) as a function of time when [S]o
>>
K
m. If the enzyme is stable,
n
will be constant, while if it is unstable
n
will decrease with time.
7.5.3.3 Effect of Equilibria
Several of the constituents of an enzyme reaction system ionize or dissociate, depending on pH. Constituents that may ionize
include the buffer, the substrate, the cofactor (if required), and the essential ionizable groups in the active site of the enzyme.
Association/dissociation occurs in the binding of substrate and cofactor into the active site. Nothing can be done with respect to
ionization of the buffer. Certainly, the ionic strength of the solution should be kept constant at all levels by use of NaCl or KCl.
When different buffers must be used, it is essential to overlap the two buffers, for one or more pH levels. Alternatively, the
buffers can be combined at all pH levels.
For fundamental studies, the substrate should be neutral, so that ionization does not affect combination of substrate with enzyme.
Practically, this may be impossible. The control of ionic strength is again very important. If a cofactor is required, the enzyme
should be saturated with the cofactor at all pH levels ([CoF] >> KCoF). For further details on this subject see Whitaker [111].
7.5.3.4 The Relationship of [S]
o
to K
m
This is a major problem in most experiments reported in the literature. Consider the minimum steps involved in enzyme-catalyzed
reactions (Eq. 7) and the possible effect of pH on these steps. First, there is binding of substrate and enzyme to form the
enzyme-substrate complex (E.S) as

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

solusi enzim diinkubasi pada 0° C, bukan pada suhu yang digunakan untuk mengukur stabilitas. Theno nilai sampeldiinkubasi pada suhu yang lebih tinggi dibandingkan denganno untuk sampel diadakan di 0° C.Bukti untuk pH ketidakstabilan juga dapat diperoleh dari plotno versus pH. PHnokurva akan miring di bawah atau di ataspHoptimal, jika ada ketidakstabilan (gambar 15). Ini adalah penjelasan untuk pH miring versusnokurva untuk pepsin dan basafosfataseGambar 13 dan pH versusnokurva E angka 14a untuk alkali fosfatase.Cara ketiga untuk menentukan ketidakstabilan enzim adalah untuk menentukan produk pembentukan (pada pH yang berbeda) sebagai fungsi dari waktu ketika o [S]>>Km. jika enzim stabil,n akan konstan, sementara jika tidak stabiln akan berkurang dengan waktu.7.5.3.3 efek sebutBeberapa konstituen sistem reaksi enzim mengionisasi atau terlepas, tergantung pada pH. Konstituen yang mungkin mengionisasitermasuk buffer, substrat, kofaktor (jika diperlukan), dan kelompok-kelompok ionizable penting di situs aktif enzim.Asosiasi disosiasi terjadi pengikatan substrat dan kofaktor ke situs aktif. Tidak ada yang dapat dilakukan sehubungan denganionisasi buffer. Tentu saja, kekuatan ion solusi harus disimpan konstan di semua tingkat dengan penggunaan NaCl atau KCl.Ketika buffer yang berbeda harus digunakan, penting untuk tumpang tindih buffer dua, untuk satu atau lebih tingkat pH. Selain itu,buffers can be combined at all pH levels.For fundamental studies, the substrate should be neutral, so that ionization does not affect combination of substrate with enzyme.Practically, this may be impossible. The control of ionic strength is again very important. If a cofactor is required, the enzymeshould be saturated with the cofactor at all pH levels ([CoF] >> KCoF). For further details on this subject see Whitaker [111].7.5.3.4 The Relationship of [S]o to KmThis is a major problem in most experiments reported in the literature. Consider the minimum steps involved in enzyme-catalyzedreactions (Eq. 7) and the possible effect of pH on these steps. First, there is binding of substrate and enzyme to form theenzyme-substrate complex (E.S) as

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

larutan enzim diinkubasi pada 0 ° C, bukan pada suhu yang digunakan untuk mengukur stabilitas. The
n
nilai o sampel
diinkubasi pada suhu yang lebih tinggi dibandingkan dengan
n
o untuk sampel diadakan di 0 ° C.
Bukti untuk ketidakstabilan pH juga dapat diperoleh dari bidang
n
o dibandingkan pH. The PHN
o
kurva akan miring di bawah atau di atas
pH
optimum, jika ada ketidakstabilan (Gbr. 15). Ini adalah penjelasan untuk pH miring dibandingkan
n
o
kurva untuk pepsin dan alkali
fosfatase
dalam Gambar 13 dan pH terhadap
n
o
kurva E pada Gambar 14a untuk alkaline phosphatase.
Cara ketiga untuk menentukan ketidakstabilan enzim adalah untuk menentukan pembentukan produk (pada berbeda pH) sebagai fungsi waktu ketika [S] o
>>
K
m. Jika enzim stabil,
n
akan konstan, sementara jika tidak stabil
n
akan menurun seiring waktu.
7.5.3.3 Pengaruh Kesetimbangan
Beberapa konstituen dari sistem reaksi enzim mengionisasi atau memisahkan, tergantung pada pH. Konstituen yang dapat mengionisasi
termasuk buffer, substrat, kofaktor (jika diperlukan), dan kelompok-kelompok terionisasi penting dalam situs aktif enzim.
Asosiasi / disosiasi terjadi di pengikatan substrat dan kofaktor ke situs aktif. Tidak ada yang bisa dilakukan sehubungan dengan
ionisasi buffer. Tentu saja, kekuatan ionik larutan harus dijaga konstan pada semua tingkat dengan menggunakan NaCl atau KCl.
Ketika buffer yang berbeda harus digunakan, adalah penting untuk tumpang tindih dua buffer, untuk satu atau lebih tingkat pH. Atau, para
buffer dapat dikombinasikan di semua tingkat pH.
Untuk studi fundamental, substrat harus netral, sehingga ionisasi tidak mempengaruhi kombinasi substrat dengan enzim.
Praktis, ini mungkin mustahil. Kontrol kekuatan ionik lagi sangat penting. Jika kofaktor membutuhkan, enzim
harus jenuh dengan kofaktor di semua tingkat pH ([CoF] >> KCoF). Untuk keterangan lebih lanjut mengenai hal ini melihat Whitaker [111].
7.5.3.4 Hubungan [S]
o
ke K
m
ini merupakan masalah utama di sebagian besar percobaan yang dilaporkan dalam literatur. Pertimbangkan langkah-langkah minimum yang terlibat dalam enzim-katalis
reaksi (Persamaan. 7) dan efek yang mungkin dari pH pada langkah-langkah ini. Pertama, ada pengikatan substrat dan enzim untuk membentuk
kompleks enzim-substrat (ES) sebagai