The following primary antibodies we

The following primary antibodies were used for immu-
nofluorescence: guinea-pig anti-insulin, 1:200 (Dako,
Grostrup, Denmark); mouse Ki67, 1:200 (MIB-1, Dako);
rabbit cleaved caspase-3, 1:50 (Biocare Medical, Concord,
CA, USA); rabbit CD3, 1:50 (Dako); mouse CD68, 1:100
(Dako). Secondary antibodies labelled with Cy3, fluores-
cein-5-isothiocyanate (FITC) and [6-((7-amino-4-methyl-
coumarin-3-acetyl)amino)hexanoic acid] (AMCA) were
obtained from Jackson Laboratories (West Grove, PA,
USA) and used at dilutions of 1:100 to 1:200. For TUNEL
staining, the in situ cell death detection kit TMR Red from
Roche Diagnostics (Mannheim, Germany) was used.

Morphometrical analysis The ratio of the beta cell area:
exocrine area was quantified as previously described [15].
The frequency of scattered single beta cells unrelated to
islets or pancreatic ducts was counted manually in each
subject and expressed relative to pancreas area. The fre-
quency of insulin-positive cells in exocrine ducts (∼60
ducts per subject) was determined manually.

Beta cell apoptosis and replication Beta cell apoptosis in
type 1 diabetic patients and non-diabetic control subjects
was identified using TUNEL staining as previously de-
scribed [15]. Since TUNEL detects DNA-strand breaks, it
is theoretically possible that the frequency of TUNEL-positive cells in a pancreatic specimen obtained at autopsy
is artefactually increased due to post-mortem changes.
Therefore, cleaved caspase-3, which represents the final
activation step in the apoptotic signalling cascade, was
used as an additional marker for beta cell apoptosis.
Moreover, the frequency of cleaved caspase-3-positive
beta cells was compared between non-diabetic individuals
with a pancreatic specimen obtained at autopsy (n=8) and
those with a specimen obtained at surgery (n=6). The
frequency of beta cell apoptosis by cleaved caspase-3 was
similar in these tissue samples (2.8±0.2 vs 1.9±0.4%, NS).
To compute a meaningful relative frequency of either beta
cell replication or apoptosis in type 1 diabetic patients vs
non-diabetic control subjects, sufficient beta cells per
subject are required. There were insufficient beta cells in
most subjects with type 1 diabetes to allow this compu-
tation. We therefore used the values for the four type 1
diabetic patients with the greatest number of detectable
beta cells and compared these with the values for the eight
non-diabetic control subjects. In these 12 subjects, slides
were co-stained for insulin (FITC) and cleaved caspase-3
(Cy3). Ten islets from each of these 12 cases were exam-
ined in detail at ×200 magnification (×20 objective, ×10
ocular). The number of beta cells was counted and the
number of beta cells positive for caspase-3 in these ten
islets documented. A total of 2,690 and 6,679 beta cells

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Antibodi utama berikut yang digunakan untuk immu-nofluorescence: guinea-babi anti insulin, 1: 200 (Dako,Grostrup, Denmark); mouse Ki67, 1: 200 (MIB-1, Dako);Kelinci membunuh caspase-3, 1:50 (Biocare medis, Concord,CA, USA); Kelinci CD3, 1:50 (Dako); mouse CD68, 1: 100(Dako). Sekunder antibodi dicap dengan Cy3, fluores-Cein-5-isothiocyanate (FITC) dan [6-((7-amino-4-methyl-Kumarin-3-asetil) amino) asam hexanoic] (AMCA) yangDiperoleh dari Jackson laboratorium (West Grove, PA,USA) dan digunakan pada pengenceran 1: 100-1: 200. Untuk TUNELpewarnaan, Deteksi kematian sel di situ kit TMR merah dariRoche diagnostik (Mannheim, Jerman) digunakan.Morphometrical analisis rasio daerah sel beta:daerah eksokrin diukur sebagai dijelaskan sebelumnya [15].Frekuensi tersebar sel beta tunggal yang tidak terkaitPulau atau saluran pankreas dikira secara manual setiapsubjek dan dinyatakan relatif ke daerah pankreas. Fre-quency sel-sel insulin-positif di eksokrin saluran (∼60saluran per subjek) ditentukan secara manual.Apoptosis sel beta dan replikasi sel Beta apoptosis padatipe 1 diabetes dan subyek kontrol bebas-diabetesdiidentifikasi menggunakan TUNEL pewarnaan sebagai sebelumnya de-scribed [15]. Karena TUNEL mendeteksi untai DNA istirahat, itusecara teoritis mungkin bahwa frekuensi TUNEL-positif sel dalam pankreas spesimen diperoleh di otopsiartefactually meningkat karena perubahan visum.Oleh karena itu, membunuh caspase-3, yang mewakili finallangkah aktivasi apoptosis signaling cascade, adalahdigunakan sebagai penanda tambahan untuk apoptosis sel beta.Selain itu, frekuensi cacad caspase-3-positifsel-sel beta dibandingkan antara individu-individu bebas-diabetesdengan spesimen pankreas yang diperoleh pada autopsi (n = 8) danmereka dengan spesimen diperoleh pada operasi (n = 6). Thefrekuensi apoptosis sel beta oleh caspase-3 cacadsama ini sampel jaringan (2.8±0.2 vs 1.9±0.4%, NS).Untuk menghitung frekuensi relatif bermakna beta baikreplikasi sel atau apoptosis dalam vs pasien diabetes tipe 1subyek kontrol non-diabetic, sel-sel beta yang cukup persubjek diperlukan. Ada tidak cukup sel-sel beta dimata pelajaran yang paling dengan tipe 1 diabetes untuk memungkinkan ini compu-tation. Kami karena itu digunakan nilai untuk empat tipe 1pasien diabetes dengan jumlah terbesar terdeteksiBeta sel dan dibandingkan dengan nilai untuk delapannon-diabetic kontrol mata pelajaran. Dalam mata pelajaran ini 12, slideitu bersama bernoda untuk insulin (FITC) dan caspase-3 cacad(Cy3). Ada sepuluh pulau dari setiap kasus 12 Ujian-ined secara rinci pada × 200 pembesaran (× 20 objektif, × 10okular). Jumlah sel-sel beta dihitung danjumlah sel-sel beta yang positif untuk caspase-3 dalam ini sepuluhPulau didokumentasikan. Jumlah sel-sel beta 2,690 dan 6,679

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Antibodi primer berikut digunakan untuk immu-
nofluorescence: hamster anti-insulin, 1: 200 (Dako,
Grostrup, Denmark); tikus Ki67, 1: 200 (MIB-1, Dako);
kelinci dibelah caspase-3, 01:50 (Biocare Medis, Concord,
CA, USA); kelinci CD3, 01:50 (Dako); tikus CD68, 1: 100
(Dako). Antibodi sekunder diberi label dengan Cy3, fluores-
cein-5-isothiocyanate (FITC) dan [6 - ((7-amino-4-metil
kumarin-3-asetil) amino) asam hexanoic] (AMCA) yang
diperoleh dari Jackson Laboratories ( West Grove, PA,
USA) dan digunakan pada pengenceran 1: 100 sampai 1: 200. Untuk TUNEL
pewarnaan, di situ deteksi kematian sel kit TMR Merah dari
Roche Diagnostics (Mannheim, Jerman) digunakan. analisis morfometri Rasio area sel beta: daerah eksokrin dikuantifikasi seperti yang dijelaskan sebelumnya [15]. Frekuensi tersebar tunggal sel beta yang tidak terkait dengan pulau atau saluran pankreas dihitung secara manual di setiap subjek dan dinyatakan relatif terhadap daerah pankreas. The fre- quency sel insulin-positif di saluran eksokrin (~60 saluran per subjek) ditentukan secara manual. apoptosis sel Beta dan apoptosis sel replikasi Beta di pasien diabetes tipe 1 dan subjek kontrol non-diabetes diidentifikasi menggunakan TUNEL pewarnaan seperti sebelumnya de - Scribed [15]. Sejak TUNEL mendeteksi istirahat DNA untai, itu secara teoritis mungkin bahwa frekuensi sel TUNEL positif dalam spesimen pankreas diperoleh pada otopsi yang artefactually meningkat karena perubahan post-mortem. Oleh karena itu, dibelah caspase-3, yang merupakan akhir langkah aktivasi dalam kaskade sinyal apoptosis, yang digunakan sebagai penanda tambahan untuk apoptosis sel beta. Selain itu, frekuensi caspase-3-positif dibelah sel beta dibandingkan antara individu non-diabetes dengan spesimen pankreas diperoleh pada otopsi (n = 8) dan mereka dengan spesimen yang diperoleh di operasi (n = 6). The frekuensi apoptosis sel beta oleh dibelah caspase-3 adalah sejenis di sampel jaringan tersebut (2,8 ± 0,2 vs 1,9 ± 0,4%, NS). Untuk menghitung frekuensi relatif bermakna baik beta replikasi sel atau apoptosis pada pasien diabetes tipe 1 vs non subyek kontrol -diabetic, sel beta yang cukup per subjek yang diperlukan. Ada sel beta tidak cukup di sebagian besar subyek dengan diabetes tipe 1 untuk memungkinkan Compu- ini tasi. Oleh karena itu kami menggunakan nilai untuk empat tipe 1 pasien diabetes dengan jumlah terbesar terdeteksi sel beta dan membandingkannya dengan nilai-nilai untuk delapan subyek kontrol non-diabetes. Dalam 12 mata pelajaran, slide yang co-bernoda untuk insulin (FITC) dan dibelah caspase-3 (Cy3). Sepuluh pulau dari masing-masing 12 kasus yang-contoh ined secara rinci di × 200 pembesaran (× 20 obyektif, × 10 mata). Jumlah sel beta dihitung dan jumlah sel beta yang positif untuk caspase-3 di sepuluh pulau didokumentasikan. Sebanyak 2.690 dan 6.679 sel beta