Gorgonian dan scleractinian jaringan karang sampel
pengolahan
dekalsifikasi Setelah, gorgonian dan scleractinian karang
sampel jaringan dicuci di air laut disaring dua kali (10
menit masing-masing). Kemudian, jaringan ditempatkan di microwave selama
dehidrasi pada urutan 95% etanol (Fisher Scientific,
Waltham, MA, 95% etanol: 100% isopropanol (2-propanol
akhirat) [Fisher Scientific, Waltham, MA], dan dibersihkan di 100%
. 2-propanol Setiap langkah berlangsung 4 menit dan suhu ditetapkan
. untuk 40oC Berikutnya, sampel jaringan disimpan dalam microwave selama
infiltrasi dalam 1: 1 larutan parafin meleleh dan 2-propanol
bawah vakum selama 10 menit pada 60oC ( Tabel 1). Sebuah putaran kedua
infiltrasi dilakukan dengan 100% meleleh parafin di bawah
vakum selama 30 menit pada 60oC. Selama proses infiltrasi, sebuah
lembaran PolarHeat ™ (Energi Beam Sciences, CT) digunakan untuk
mengubah energi microwave untuk memanaskan, mengakibatkan peningkatan
. difusivitas parafin melalui jaringan [14]
sectioning dan hematoxylin dan eosin (H & E) pewarnaan
bagian Tipis (4-5μm) dari gorgonian dan scleractinian
jaringan karang diperoleh dengan menggunakan mikrotom putar (Model
820; Amerika Optical ., Buffalo, NY) Bagian yang ditempelkan
slide subbed-kaca (chrome coating tawas-gelatin solusi:
50,0 g gelatin (Mallinckrodt, St. Louis, MO) dan 5,0 g kromium
kalium sulfat (Mallinckrodt, St. Louis, MO) di 1 L suling
air deionisasi.
Bagian yang deparaffinized dengan Histo-jelas dua kali, (30 s
masing-masing, Diagnostik Nasional, Charlotte, NC), kembali terhidrasi melalui
serangkaian turun dari ethanols (95% -70% etanol masing-masing untuk 30
s), dicuci di suling air deionisasi (2X setiap 30 s), bernoda
di Harris hematoxylin (CI # 75290, Sigma Aldrich, St. Louis,
MO) solusi untuk 1 menit, dicuci dalam menjalankan air keran selama 1
menit, dibedakan dalam larutan Scott (10g natrium bikarbonat;
2g magnesium sulfat dalam 1 L air suling deionisasi; [15])
selama 30 s, dan dicuci dalam air keran lagi selama 1 menit.
kebiruan dilakukan dengan menggunakan air amonia 0,2% selama 30 s untuk 1 menit.
Sedang diterjemahkan, harap tunggu..
