The lecithotrophic strategy of deve

The lecithotrophic strategy of development (Reznick et al., 2002) entails the provisioning of embryos with resources from the maternal yolk deposit rather than from a placenta. It allows the extracorporal culture of guppy embryos. After showing that guppy embryos can continue development in culture (Fig. 2), we investigated whether we could grow explanted embryos in culture for the entire period of embryonic development, and whether they would hatch
in vitro. Figure 3 shows the development of embryos explanted at blastodisc stage for 23 subsequent days. The embryonic streak stage was reached on day 2 after explanting (Fig. 3B),
and the optic cup stage, with perceptible heartbeat, on day 3 (Fig. 3C). The yolk portal system became more pronounced between days 3 and 6 (Fig.3C–F). Eye pigmentation started at day 4
(Fig. 3D). Pigment cells on the head first appeared between days 7 and 8
(Fig. 3G,H), and they gradually increased in number and size throughout the experiment (Fig. 3G–R). After 13 days in culture, iridophores were mainly seen on the choroid of the eyes
(Fig. 3N–U), and after 14 days they were also observed over the midbrain (Fig. 3P–U). On day 21 to 23, melanophores could be seen in the tail and on the tail fin, which is wrapped around
the yolk (Fig. 3S–U). However, after day 19 in culture, the yolk became very heterogeneous in structure and it appeared to contain some large, coalesced oil droplets. A considerable amount of yolk remained after 23 days of culture (Fig. 3U), when the embryowas still alive but whose development was delayed relative to embryos developing in the follicle (see below). In culture, the development of pigmentation, somites, and appendages was symmetrical, but heart development
revealed obvious differences between individuals. In general, cultured embryos moved their eyes, tails, and pectoral fins within the vitelline envelope. Although normal morphology often became compromised after more than 2 weeks in culture, several embryos remained alive for a period of up to 29 days in culture, corresponding to 37 dap, although these individuals
failed to completely resorb the yolk and retract the yolk sac. Although embryos developed significantly slower in vitro than in the ovary, it was impossible to exactly quantify the developmental delay in culture, due to the obvious spread in developmental stage within each batch of eggs (data not shown). Why embryos could not be cultured for the entire period of their embryonic development remains unclear. Varying the concentration of fetal calf serum in the medium and mimicking a diurnal cycle of dim light did not significantly improve development.
That some individuals survived in vitro for longer than the normal gestational period suggests that survival in vitro is not the limiting factor. Although guppy embryos are considered as completely lecithotrophic (Thibault and Schultz, 1978; Reznick et al., 2002), we cannot exclude the possibility that specific factors required for normal development are delivered by means of the maternal circulation and, therefore, that these would be lacking in vitro. Haas-Andela (1976) succeeded in rearingXiphophorusembryos in vitro, starting at neurulation, and obtained
fertile fish. Similar to guppies, Xiphophorus embryos develop more slowly in vitro than in the follicle, and often fail to retract the yolk sac. Of interest, both survival and yolk sac
retraction could be significantly improved by addition of fish-conditioned water to the culture medium and by exposure of fully developed embryos to conditioned water by means of a dialysis bag (Haas-Andela, 1976). These findings suggest that retraction of the yolk sac may be the most critical step of in vitro culture in both species and that it may require as yet unidentified low molecular weight factors from the mother, which could be contained in or
substituted for by the aquarium water. Whereas guppy embryos cultured, from 8 dap onward (blastodisc to beginning early-eyed stage) showed arrested embryonic development, some
embryos explanted during late gestation (17 to 21 dap) consumed and internalized the remaining yolk, and became mature and fertile fish (data not shown). When embryos were explanted during the last third of gestation, individuals whose vitelline envelope was removed survived for longer on average. Moreover, swimming embryos occasionally became fertile adults, indicating that positive effects of active movement on gas exchange and waste disposal may exist, indicating that these parameters may need future optimization. Our success in culturing guppy embryos in vitro demonstrates that some of the drawbacks of live bearing fish as objects of early developmental studies can be overcome. Extension of in vitro culture for the entire gestation period would allow for experimental procedures not normally possible in live bearers, including lineage tracing and genetic manipulations, such as RNA interference or application of morpholino oligonucleotides.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Lecithotrophic strategi pembangunan (Reznick et al., 2002) memerlukan penyediaan embrio dengan sumber daya dari deposit ibu kuning daripada plasenta. Hal ini memungkinkan extracorporal budaya guppy embrio. Setelah menunjukkan bahwa guppy embrio dapat melanjutkan pengembangan budaya (Fig. 2), kita menyelidiki apakah kami bisa tumbuh explanted embrio dalam budaya untuk tempoh perkembangan embrio, dan apakah mereka akan menetasin vitro. Gambar 3 menunjukkan perkembangan embrio yang explanted pada tahap blastodisc untuk 23 hari berikutnya. Tahap embrio beruntun tercapai pada hari 2 setelah explanting (Fig. 3B),dan tahap optik Piala, dengan kentara detak jantung, pada hari ke-3 (Fig. 3 c). Sistem portal kuning menjadi lebih jelas antara hari 3 dan 6 (Fig.3C–F). Mata pigmentasi dimulai pada 4 hari(Gambar 3D). Sel-sel pigmen di kepala pertama sekali muncul antara hari 7 dan 8(Fig. 3 g, H), dan mereka secara bertahap meningkat dalam jumlah dan ukuran seluruh percobaan (Fig. 3 G-R). Setelah 13 hari dalam budaya, bisa berubah terutama terlihat pada koroid mata(Fig. 3N-U), dan setelah 14 hari, mereka juga diamati selama otak tengah (Fig. 3P-U). Pada hari 21 sampai 23, melanophores bisa dilihat di ekor dan sirip ekor, yang dibungkus di sekitarkuning telur (Fig. 3S-U). Namun, setelah hari 19 di budaya, kuning telur menjadi sangat heterogen dalam struktur dan tampaknya berisi beberapa tetesan minyak besar, coalesced. Sejumlah besar kuning tetap setelah 23 hari budaya (Fig. 3U), ketika embryowas masih hidup tetapi pembangunan yang tertunda relatif terhadap embrio yang berkembang di folikel (lihat bawah). Dalam budaya, pengembangan pigmentasi, somites, dan pelengkap adalah simetris, tetapi pembangunan jantungmengungkapkan perbedaan jelas antara individu. Secara umum, berbudaya embrio dipindahkan mata mereka, ekor dan sirip dada dalam amplop vitelline. Meskipun normal morfologi seringkali menjadi terganggu setelah lebih dari 2 minggu dalam budaya, beberapa embrio tetap hidup selama jangka waktu hingga 29 hari dalam budaya, sesuai dengan 37 dap, meskipun orang-orang inigagal untuk benar-benar mengecil kuning telur dan menarik kantung kuning. Meskipun embrio dikembangkan secara signifikan lebih lambat secara in vitro dari dalam indung telur, itu tidak mungkin untuk mengkuantifikasi persis keterlambatan perkembangan budaya, karena penyebaran jelas dalam tahap perkembangan dalam setiap kumpulan telur (data tidak ditampilkan). Mengapa embrio tidak dapat dikultur selama seluruh perkembangan embrio mereka tetap tidak jelas. Bervariasi konsentrasi serum betis janin dalam jangka menengah dan meniru siklus diurnal cahaya redup tidak signifikan membaik pembangunan.Bahwa beberapa orang Selamat secara in vitro selama lebih dari periode kehamilan normal menunjukkan bahwa kelangsungan hidup secara in vitro bukanlah faktor pembatas. Meskipun guppy embrio dianggap sebagai benar-benar lecithotrophic (Thibault dan Schultz, 1978; Reznick et al., 2002), kami tidak dapat meniadakan kemungkinan bahwa faktor-faktor tertentu yang diperlukan untuk perkembangan normal yang disampaikan melalui sirkulasi ibu dan, oleh karena itu, bahwa ini akan kurang secara in vitro. Haas-Andela (1976) berhasil dalam rearingXiphophorusembryos vitro, mulai dari neurulation, dan memperolehikan yang subur. Mirip dengan guppies, embrio Xiphophorus mengembangkan lebih lambat secara in vitro daripada dalam folikel, dan sering gagal untuk menarik kantung kuning. Menarik, kelangsungan hidup dan kuning sacpenyusutan dapat secara signifikan ditingkatkan dengan penambahan ber-ikan air untuk media budaya dan dengan paparan sepenuhnya dikembangkan embrio ber air dengan kantong dialisis (Haas-Andela, 1976). Temuan ini menunjukkan bahwa penyusutan kantung kuning mungkin langkah yang paling kritis secara in vitro budaya di kedua spesies dan bahwa mungkin memerlukan faktor-faktor berat molekul rendah yang belum teridentifikasi dari ibu, yang dapat terkandung dalam ataudigantikan oleh akuarium air. Sedangkan guppy embrio berbudaya, dari 8 dap seterusnya (blastodisc untuk memulai tahap awal bermata) menunjukkan ditangkap perkembangan embrio, beberapaembrio yang explanted selama akhir kehamilan (17 untuk 21 dap) dikonsumsi dan menginternalisasi sisa kuning telur, dan menjadi matang dan subur ikan (data tidak ditampilkan). Ketika embrio yang explanted selama sepertiga terakhir kehamilan, individu amplop vitelline yang dihapus bertahan lebih lama rata-rata. Selain itu, berenang embrio kadang-kadang menjadi subur dewasa, menunjukkan bahwa efek positif dari gerakan aktif pada gas pertukaran dan pembuangan limbah mungkin ada, menunjukkan bahwa parameter ini mungkin perlu optimasi masa depan. Keberhasilan kami dalam lingkungat guppy embrio secara in vitro menunjukkan bahwa beberapa kekurangan ikan hidup bantalan sebagai objek studi perkembangan awal dapat mengatasi. Ekstensi secara in vitro budaya untuk periode kehamilan seluruh akan memungkinkan untuk prosedur eksperimental tidak biasanya mungkin dalam hidup pembawa, termasuk keturunan pelacakan dan manipulasi genetik, seperti interferensi RNA atau penerapan Oligonukleotida morpholino.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Strategi lecithotrophic pembangunan (Reznick et al., 2002) memerlukan penyediaan embrio dengan sumber daya dari deposit kuning ibu bukan dari plasenta. Hal ini memungkinkan budaya extracorporal embrio guppy. Setelah menunjukkan bahwa embrio guppy dapat melanjutkan pembangunan dalam budaya (Gbr. 2), kami menyelidiki apakah kita bisa tumbuh embrio explanted dalam budaya untuk seluruh periode perkembangan embrio, dan apakah mereka akan menetas
in vitro. Gambar 3 menunjukkan perkembangan embrio explanted pada tahap blastodisc selama 23 hari berikutnya. Tahap beruntun embrio dicapai pada hari 2 setelah explanting (Gambar. 3B),
dan tahap cangkir optik, dengan detak jantung jelas, pada hari ke 3 (Gambar. 3C). Kuning sistem portal menjadi lebih jelas antara hari 3 dan 6 (Fig.3C-F). Pigmentasi mata dimulai pada hari 4
(Gambar. 3D). Sel pigmen di kepala pertama muncul antara hari 7 dan 8
(Gambar. 3G, H), dan mereka secara bertahap meningkat dalam jumlah dan ukuran seluruh percobaan (Gambar. 3G-R). Setelah 13 hari dalam budaya, iridophores terutama terlihat pada koroid mata
(Gambar. 3N-U), dan setelah 14 hari mereka juga diamati selama otak tengah (Gambar. 3P-U). Pada hari 21-23, melanophores bisa dilihat di bagian ekor dan pada sirip ekor, yang melilit
kuning (Gambar. 3S-U). Namun, setelah hari 19 dalam budaya, kuning telur menjadi sangat heterogen dalam struktur dan ternyata mengandung beberapa besar, tetesan minyak berkoalisi. Sejumlah besar kuning tetap setelah 23 hari dari budaya (Gambar. 3U), ketika embryowas masih hidup tapi yang perkembangannya tertunda relatif terhadap embrio berkembang dalam folikel (lihat di bawah). Dalam budaya, pengembangan pigmentasi, somit, dan pelengkap adalah simetris, tetapi pengembangan jantung
menunjukkan perbedaan yang jelas antara individu. Secara umum, embrio berbudaya pindah mata mereka, ekor, dan sirip dada dalam amplop vitelline. Meskipun morfologi normal sering menjadi terganggu setelah lebih dari 2 minggu dalam budaya, beberapa embrio tetap hidup untuk jangka waktu hingga 29 hari dalam budaya, sesuai dengan 37 hst, meskipun orang-orang
gagal untuk sepenuhnya menyerap kuning telur dan menarik kuning telur. Meskipun embrio berkembang secara signifikan lebih lambat in vitro daripada di ovarium, itu tidak mungkin untuk persis mengukur keterlambatan perkembangan dalam budaya, karena penyebaran jelas dalam tahap perkembangan dalam setiap batch telur (data tidak ditampilkan). Mengapa embrio tidak bisa dibudidayakan untuk seluruh periode perkembangan embrio mereka masih belum jelas. Memvariasikan konsentrasi serum janin anak sapi di media dan meniru siklus diurnal cahaya redup tidak secara signifikan meningkatkan pembangunan.
Itu beberapa individu selamat in vitro selama lebih dari periode kehamilan yang normal menunjukkan bahwa kelangsungan hidup in vitro bukan faktor pembatas. Meskipun embrio guppy dianggap sebagai benar-benar lecithotrophic (Thibault dan Schultz, 1978;. Reznick et al, 2002), kita tidak bisa mengesampingkan kemungkinan bahwa faktor khusus yang diperlukan untuk perkembangan normal yang disampaikan dengan cara sirkulasi ibu dan, karena itu, bahwa ini akan menjadi kurang dalam vitro. Haas-Andela (1976) berhasil rearingXiphophorusembryos in vitro, mulai neurulasi, dan memperoleh
ikan subur. Mirip dengan guppies, Xiphophorus embrio berkembang lebih lambat in vitro daripada di folikel, dan sering gagal untuk menarik kembali kantung kuning telur. Yang menarik, baik kelangsungan hidup dan kuning kantung
retraksi dapat secara signifikan ditingkatkan dengan penambahan air-ikan dikondisikan untuk media kultur dan oleh paparan dari embrio berkembang penuh air dikondisikan dengan cara kantong dialisis (Haas-Andela, 1976). Temuan ini menunjukkan bahwa pencabutan dari kuning telur mungkin langkah yang paling penting dari kultur in vitro pada kedua spesies dan bahwa hal itu mungkin memerlukan faktor berat badan yang belum teridentifikasi molekul rendah dari ibu, yang bisa terkandung dalam atau
digantikan oleh air akuarium . Sedangkan embrio guppy berbudaya, dari 8 dap seterusnya (blastodisc untuk mulai tahap awal bermata) menunjukkan ditangkap perkembangan embrio, beberapa
embrio explanted selama akhir kehamilan (17-21 hst) dikonsumsi dan diinternalisasi kuning yang tersisa, dan menjadi matang dan ikan subur (data tidak ditampilkan). Ketika embrio explanted selama sepertiga terakhir kehamilan, individu yang amplop vitelline telah dihapus bertahan lebih lama rata-rata. Selain itu, embrio berenang sesekali menjadi orang dewasa yang subur, yang menunjukkan bahwa efek positif dari gerakan aktif pada pertukaran gas dan pembuangan limbah mungkin ada, menunjukkan bahwa parameter ini mungkin perlu optimasi masa depan. Keberhasilan kami dalam kultur embrio guppy in vitro menunjukkan bahwa beberapa kelemahan ikan bantalan hidup sebagai objek studi perkembangan awal dapat diatasi. Perpanjangan kultur in vitro untuk periode kehamilan seluruh akan memungkinkan untuk prosedur eksperimental biasanya tidak mungkin dalam pembawa hidup, termasuk keturunan tracing dan manipulasi genetik, seperti interferensi RNA atau penerapan oligonukleotida morfolino.