containing 60 fish in each group. G

containing 60 fish in each group. Group A served as negative control, group B received only 0.2 mL of PBS
injection, group C received 0.2 mL of mineral oil (MO), group D received 0.2 mL of formalin-killed A.
hydrophila(FKC) suspension (10
8
cells/fish) in PBS and mineral oil (1:1), groups E, F and G received 10,
100, 1,000lg of freeze-dried garlic powder suspended in 0.2 mL of mineral oil: FKC suspension in 1:1 ratio
(intraperitoneal immunization). Each group was divided into two subgroups according to two experimental
time periods, i.e., 10 and 30 days of trials. Further, each subgroup containing thirty fish was randomly
distributed into six tanks (500 L ferrocement tank) with five fish in each. Out of those six tanks, fish of three
tanks were utilized for studying immune parameters whereas rest three tanks for challenge study. Each
parameter was studied in triplicate at a particular time period. The anesthetized fish (15 fish from each group)
were bled by caudal venipuncture on 10th and 30th days post-vaccination. The collected sera samples were
stored at-70C before being used in the study.
Measurement of serum hemolysin and agglutination titers
Serum hemolysin and bacterial agglutinating titers were measured according to Kumari and Sahoo (2005) and
Sahoo and Mukherjee (2001). Experimental assays were performed in duplicate for each parameter of the
individual fish of all seven groups and the mean ±SE for each group was calculated. One-way ANOVA
followed by DMRT was performed to find out the significant difference (pB0.05) among the groups.
Challenge study
For the challenge study, five fish from each of three replicate tanks of each subgroup (total 15 number of fish)
were challenged separately with LD50dose of 8910
5
live cells ofA. hydrophilain 0.1 mL PBS/20 g fish via
intraperitoneal route (standardized according to Reed and Muench 1938) on 10th and 30th days post-vaccination to study the level of protection induced by different vaccine-adjuvant formulations. The fish were
observed for 10 days post-challenge and percent mortality was calculated.
Results
The SDS-PAGE analysis of different grades of garlic–FKC suspensions incubated for two time intervals
showed similar banding patterns. The bands present in the formalin-killed cells only were well preserved in
different grades of garlic–FKC suspensions at both time periods of incubations. There was no degradation
product noticed in terms of extra fine bands due to effect of garlic extract on FKC samples. Further, two
protein bands (one*14 kDa and another between*70–90 kDa), which were present in only garlic sample,
were also present in all concentrations of garlic–FKC suspensions (Fig.1).
The present study demonstrated a significantly high hemolysin titer in the lowest dose of garlic (i.e., 10lg
of freeze-dried garlic powder)-adjuvant formulation on day 30. At day 10, all the garlic-injected groups
showed increased titers whereas it was the highest in group G. Other groups which received PBS or MO or
FKC?MO showed no difference in natural hemolysin titer in comparison to control (Fig.2).
The effects of different antigenic formulations on days 10 and 30 of injection on specific immunity were
measured through bacterial agglutination titer (Fig.3), which revealed no significant difference in agglutination titer among groups on day 10. On day 30, the highest agglutination titer was marked in garlic (10lg)-based adjuvant-treated group.
In challenge study, control fish showed highest mortality (50 %) among the groups challenged 10 days
post-vaccination. Group E, which received garlic (10lg)-based adjuvant had the lowest mortality (0 %)
among these groups. The groups receiving other two doses of garlic showed similar mortality pattern as
compared to the fish in groups received either PBS or MO. (Fig.4). On day 30, groups E and F, those received
garlic (10 and 100lg)-based adjuvant showed the lowest mortality in comparison to all other groups. The
highest mortality was recorded in groups B and C which received only PBS or MO.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

mengandung 60 ikan dalam setiap grup. Grup A menjabat sebagai control negatif, group B menerima hanya 0.2 mL PBSinjeksi, Grup C diterima 0.2 mL minyak mineral (MO), kumpulan D menerima 0.2 mL formalin membunuh A.hydrophila(FKC) suspensi (108sel/ikan) di PBS dan minyak mineral (1:1), Grup E, F dan G menerima 10,100, 1, 000lg beku-kering bawang putih bubuk ditangguhkan dalam 0.2 mL minyak mineral: FKC suspensi dalam rasio 1:1(intraperitoneal imunisasi). Masing-masing kelompok ini dibagi menjadi dua subkumpulan menurut dua eksperimentalperiode, yaitu, 10 waktu dan 30 hari percobaan. Selanjutnya, setiap subkumpulan yang mengandung tiga puluh ikan adalah secara acakdidistribusikan ke enam tanki (500 L ferrocement tank) dengan lima ikan di masing-masing. Dari orang-orang enam tanki, ikan tigaTank digunakan untuk mempelajari kekebalan parameter sedangkan sisanya tiga Tank untuk tantangan studi. Masing-masingparameter dipelajari dalam rangkap tiga pada periode waktu tertentu. Ikan membius (15 ikan dari setiap grup)bled dengan caudal venapungsi pada 10 dan 30 hari pasca vaksinasi. Sampel dikumpulkan sera yangdisimpan di-70 C sebelum digunakan dalam studi.Pengukuran serum hemolysin dan aglutinasi titersSerum hemolysin dan bakteri agglutinating titers diukur sesuai Kumari dan Sahoo (2005) danSahoo dan Mukherjee (2001). Eksperimental tes dilakukan ganda untuk setiap parameterindividu ikan semua tujuh kelompok dan ±SE berarti untuk setiap kelompok dihitung. Sekali jalan ANOVAdiikuti oleh DMRT dilakukan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan (pB0.05) antara kelompok-kelompok.Tantangan studiUntuk studi tantangan, lima ikan dari masing-masing dari tiga tangki replikasi setiap subgrup (15 jumlah ikan)ditantang secara terpisah dengan LD50dose 89105ofA sel-sel hidup. hydrophilain 0, 1 mL PBS 20 g ikan melaluiintraperitoneal rute yang (standar Reed dan Muench 1938) pada 10 dan 30 hari pasca vaksinasi untuk studi tingkat perlindungan yang disebabkan oleh vaksin-ajuvan berbeda formulasi. Ikan-ikandiamati selama 10 hari kematian pasca tantangan dan persen dihitung.HasilAnalisis SDS-halaman kelas yang berbeda dari bawang putih-FKC suspensi diinkubasi untuk dua interval waktumenunjukkan pola banding yang serupa. Band-band yang hadir dalam formalin yang membunuh sel-sel hanya yang terawat dengan baik dikelas yang berbeda dari bawang putih-FKC suspensi baik pada waktu periode incubations. Ada tidak ada degradasimelihat dalam hal ekstra halus band karena efek bawang putih produk ekstrak pada sampel FKC. Lebih jauh, duaprotein band (satu * 14 kDa dan satu lagi antara * 70-90 kDa), yang hadir hanya bawang putih sampel,yang juga hadir di semua konsentrasi suspensi bawang putih-FKC (gambar 1).Penelitian ini menunjukkan cukup tinggi hemolysin titer dalam dosis terendah bawang putih (yaitu, 10lgbeku-kering bawang putih bubuk)-formulasi ajuvan pada hari 30. Hari 10, Semua bawang putih-disuntikkan kelompokmenunjukkan peningkatan titers sedangkan itu tertinggi di kelompok G. Kelompok lain yang menerima PBS atau MO atauFKC?MO menunjukkan tidak ada perbedaan dalam alam hemolysin titer dibandingkan dengan kontrol (Gbr.2).Efek dari formulasi antigen yang berbeda pada hari 10 dan 30 injeksi pada kekebalan tertentu yangdiukur melalui bakteri aglutinasi titer (gambar.3), yang menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan dalam aglutinasi titer antara kelompok-kelompok pada 10 hari. Pada hari 30, titer aglutinasi tertinggi ditandai dalam bawang putih (10lg)-berbasis kelompok diperlakukan ajuvan.Dalam studi tantangan, kontrol ikan menunjukkan angka kematian tertinggi (50%) antara kelompok-kelompok yang menantang 10 haripasca vaksinasi. Grup E, yang menerima bawang putih (10lg)-berbasis ajuvan telah kematian terendah (0%)kelompok-kelompok ini. Kelompok yang menerima dua dosis bawang putih lainnya menunjukkan pola mortalitas sama sebagaidibandingkan dengan ikan di kelompok-kelompok yang menerima PBS atau Mo (Fig.4: perubahan). Pada hari 30, Grup E dan F, yang diterimabawang putih (10 dan 100lg)-berbasis ajuvan menunjukkan kematian terendah dibandingkan dengan kelompok-kelompok lain. Thekematian tertinggi tercatat di Grup B dan C yang diterima hanya PBS atau MO.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

mengandung 60 ikan di masing-masing kelompok. Grup A menjabat sebagai kontrol negatif, kelompok B hanya menerima 0,2 mL PBS
injeksi, kelompok C menerima 0,2 ml minyak mineral (MO), kelompok D menerima 0,2 mL formalin-membunuh A.
hydrophila (FKC) suspensi (10
8
sel / Ikan) di PBS dan minyak mineral (1: 1), kelompok E, F dan G menerima 10,
100, 1,000lg bawang putih bubuk beku-kering ditangguhkan dalam 0,2 mL minyak mineral: FKC suspensi dalam rasio 1: 1
(imunisasi intraperitoneal ). Setiap kelompok dibagi menjadi dua sub kelompok menurut dua percobaan
periode waktu, yaitu, 10 dan 30 hari percobaan. Selanjutnya, masing-masing subkelompok yang berisi tiga puluh ikan secara acak
didistribusikan ke dalam enam tangki (tangki ferosemen 500 L) dengan lima ikan di setiap. Dari enam tangki, ikan tiga
tank digunakan untuk mempelajari parameter kekebalan sedangkan sisanya tiga tangki untuk tantangan studi. Setiap
parameter dipelajari dalam rangkap tiga pada periode waktu tertentu. Ikan dibius (15 ikan dari masing-masing kelompok)
yang berdarah oleh venipuncture ekor pada hari-hari ke-10 dan ke-30 pasca-vaksinasi. Sampel serum yang dikumpulkan
disimpan pada-70? C sebelum digunakan dalam penelitian.
Pengukuran serum hemolisin dan aglutinasi titer
hemolisin Serum dan titer agglutinating bakteri diukur menurut Kumari dan Sahoo (2005) dan
Sahoo dan Mukherjee (2001). Tes eksperimen dilakukan dalam rangkap untuk masing-masing parameter dari
individu ikan dari semua tujuh kelompok dan rata-rata ± SE untuk setiap kelompok dihitung. Satu-way ANOVA
dilanjutkan dengan DMRT dilakukan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan (pB0.05) antara kelompok-kelompok.
studi Tantangan
Untuk studi tantangan, lima ikan dari masing-masing tiga tangki mereplikasi setiap sub-kelompok (Total 15 jumlah ikan)
yang ditantang secara terpisah dengan LD50dose dari 8910
5
sel hidup OFA. hydrophilain 0,1 mL PBS / 20 g ikan melalui
intraperitoneal rute (standar menurut Reed dan Muench 1938) pada 10 dan ke-30 pasca-vaksinasi untuk mempelajari tingkat perlindungan yang disebabkan oleh formulasi vaksin adjuvant yang berbeda. Ikan
diamati selama 10 hari pasca-tantangan dan mortalitas persen dihitung.
Hasil
Analisis SDS-PAGE nilai yang berbeda dari suspensi bawang putih-FKC diinkubasi selama dua interval waktu
menunjukkan pola pita yang sama. Band hadir dalam sel formalin dibunuh hanya yang terpelihara dengan baik di
kelas yang berbeda dari suspensi bawang putih-FKC pada kedua periode waktu incubations. Tidak ada degradasi
produk melihat dari segi band ekstra baik karena efek dari ekstrak bawang putih pada sampel FKC. Selanjutnya, dua
pita protein (satu * 14 kDa dan satu lagi antara 70-90 kDa *), yang hadir hanya sampel bawang putih,
juga hadir di semua konsentrasi bawang putih-FKC suspensi (Gambar 1).
Penelitian ini menunjukkan titer hemolisin cukup tinggi dalam dosis terendah bawang putih (yaitu, 10lg
dari beku-kering bubuk bawang putih) formulasi -adjuvant pada hari 30. Pada hari 10, semua kelompok bawang putih-disuntikkan
menunjukkan peningkatan titer sedangkan itu yang tertinggi di grup G. Kelompok-kelompok lain yang menerima PBS atau MO atau
FKC? MO menunjukkan tidak ada perbedaan dalam hemolisin titer alami dibandingkan dengan kontrol (Gbr.2).
Efek dari formulasi antigenik yang berbeda pada hari 10 dan 30 injeksi pada imunitas spesifik
diukur melalui bakteri aglutinasi titer (Gbr.3), yang menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan dalam aglutinasi titer antara kelompok-kelompok pada hari 10. Pada hari 30, yang aglutinasi titer tertinggi ditandai dalam bawang putih (10lg) kelompok adjuvant diobati berbasis.
Dalam tantangan studi, ikan kontrol menunjukkan tertinggi mortalitas (50%) di antara kelompok-kelompok menantang 10 hari
pasca-vaksinasi. Grup E, yang menerima bawang putih (10lg) berbasis adjuvant memiliki tingkat kematian terendah (0%)
di antara kelompok-kelompok ini. Kelompok-kelompok yang menerima dua dosis lain bawang putih menunjukkan pola yang sama seperti kematian
dibandingkan dengan ikan dalam kelompok menerima baik PBS atau MO. (Gbr.4). Pada hari 30, kelompok E dan F, yang diterima
bawang putih (10 dan 100lg) adjuvant berbasis menunjukkan angka kematian terendah dibandingkan dengan semua kelompok lainnya. The
kematian tertinggi terjadi pada kelompok B dan C yang diterima hanya PBS atau MO.