Assay MethodsEstradiolTo analyze fe

Assay Methods
Estradiol
To analyze fecal extracts of the female hornbill, an estradiol RIA was utilized as
previously described [Medler and Lance, 1998]. The estradiol assay was a
modification of an 125I assay kit (Diagnostics Products Corp., Los Angeles, CA).
Two microliters of the reconstituted fecal extract were combined with the estradiol
antiserum, followed by a 2-hr incubation at room temperature.

then added and the samples were incubated for another hour at room temperature.
An addition of 0.5 ml of dese charcoal dextran solution terminated the competitive
reaction by separating bound from free hormones. After a 10-min incubation, the
samples were centrifuged for 15 min at room temperature at 1,500 g. Then 700 ml of
the supernatant were pipetted into 1275 mm test tubes, and counted in a gamma
counter.
Fecal extracts which were serially diluted (0–1:256) and analyzed in the
estradiol assay resulted in a curve parallel to the estradiol standards (r¼0.9755). The
intra-assay coefficient of variation was 9% and 10% at 20% and 70% binding (n¼18
and 20), respectively. The interassay coefficient of variation was 20% for all three
controls provided. Assay sensitivity was calculated at 1.29 pg/tube.
High-pressure liquid chromatography (HPLC) separation of the fecal extract
revealed the radioactive estradiol-17-beta elution was more polar by two tubes
(2 minutes) than the immunoreactive peak. The exact structure of this estrogen
compound was not further identified.

Testosterone
Testosterone (T) RIAs were run on the samples from all study birds (male and
female). Fifty microliters of fecal extract were assayed for each of the male hornbill
samples. For the T RIA, antisera (produced against testosterone 19-carboxymethylether;
ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) was combined with 10,000 cpm H3-T
(ICN Biomedicals). The cross-reactivity of the antisera in this assay is: testosterone
100%, 5a-dihydrotestosterone 18.75%, 5a-androstane-3a, 17b-diol 3.00%, 5-
androstene-3b, 17b-diol 1.00%; all others tested were o1.00%. After an overnight
incubation at 41C, the competitive reaction was terminated by the addition of 0.5 ml
of charcoal dextran solution. Following a 30-min incubation at 41C, the samples
were centrifuged for 15 min (41C), and decanted into scintillation vials. Scintillation
fluid (5 ml) was added to each of the vials and counted for 2 min in a Beckman liquid
scintillation spectrometer. The same procedure was followed for the females’
samples, except that 100 ml of fecal extract was assayed to account for their lower
basal testosterone levels.
Fecal extracts that were serially diluted and analyzed in the assay gave a
parallel displacement curve to the testosterone standard curve (r¼0.992). The intraassay
coefficient of variation was 8% and 6% at 20% and 70% binding (n¼7 and 7),
respectively. The interassay coefficient of variation was 14% for 82 ng/tube and 11%
for 49 ng/tube. The sensitivity was calculated at 8.11 pg/tube.
HPLC separation of the fecal extract showed antibody immunoreactivity
consistent with the elution of the radioactive testosterone marker. This was the
major immunoreactive peak.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

Metode pengujianEstradiolUntuk menganalisis tinja ekstrak Rangkong perempuan, estradiol RIA digunakan sebagaidijelaskan sebelumnya [Medler dan Lance, 1998]. Estradiol assay adalahModifikasi 125I assay Kit (diagnostik produk Corp, Los Angeles, CA).Dua microliters ekstrak tinja dilarutkan digabungkan dengan estradiolantiserum, diikuti oleh 2-jam inkubasi pada suhu kamar.kemudian ditambahkan dan sampel yang diinkubasi selama satu jam pada suhu kamar.Penambahan 0.5 ml larutan arang dextran dese dihentikan yang kompetitifreaksi dengan memisahkan diikat dari hormon gratis. Setelah 10 menit inkubasi,sampel yang disentrifugasi untuk 15 menit pada suhu kamar di g 1.500. Kemudian 700 mlsupernatant pipetted ke 12 75 mm tabung, dan dihitung dalam gammaCounter.Ekstrak kotoran yang telah diencerkan dengan serial (0-1:256) dan dianalisa diestradiol assay mengakibatkan sejajar kurva standar estradiol (r¼0.9755). Theintra-assay koefisien variasi adalah 9% dan 10% pada 20% dan 70% mengikat (n¼18dan 20), masing-masing. Koefisien interassay variasi adalah 20% untuk semua tigakontrol yang disediakan. Sensitivitas assay dihitung di pg/tabung 1.29.Kromatografi cair tekanan tinggi (HPLC) pemisahan ekstrak tinjamengungkapkan elution estradiol-17-beta radioaktif lebih kutub oleh dua tabung(2 menit) dari puncak immunoreactive. Struktur yang tepat estrogen inisenyawa ini tidak lebih lanjut diidentifikasi.TestosteronRia testosteron (T) dijalankan pada sampel dari semua burung studi (laki-laki danLaki-laki). Lima puluh microliters ekstrak kotoran yang diuji untuk masing-masing Rangkong laki-lakisampel. Untuk T RIA, antisera (diproduksi terhadap testosteron 19-carboxymethylether;ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) dikombinasikan dengan 10.000 BPT H3-T(ICN Biomedicals). Cross-reactivity antisera dalam assay ini adalah: testosteron100%, 5a-dihidrotestosteron 18,75 5a-androstane-3a, 17b diol 3,00%, 5 -androstene-3b, 1,00 17b-diol %; Semua lain yang diuji adalah o1.00%. Setelah semalaminkubasi c 41, reaksi kompetitif diakhiri dengan penambahan 0.5 mllarutan dextran arang. Setelah 30 menit inkubasi c 41, sampeldisentrifugasi untuk 15 menit (41C), dan tertuang ke dalam cawan-cawan sintilasi. Sintilasifluida (5 ml) ditambahkan ke masing-masing cawan dan dihitung 2 menit dalam cairan Beckmanspektrometer sintilasi. Prosedur yang sama diikuti untuk wanita'sampel, kecuali bahwa 100 ml ekstrak tinja diuji untuk memperhitungkan mereka rendahkadar testosteron basal.Tinja ekstrak yang serial diencerkan dan dianalisis dalam assay memberikanparalel perpindahan kurva ke kurva standar testosteron (r¼0.992). IntraassayKoefisien variasi adalah 8% dan 6% 20% dan 70% mengikat (n¼7 dan 7),masing-masing. Koefisien interassay variasi adalah 14% untuk 82 ng/tabung dan 11%untuk 49 ng/tabung. Sensitivitas dihitung di pg/tabung 8.11.Pemisahan HPLC ekstrak tinja menunjukkan antibodi immunoreactivitykonsisten dengan elution penanda testosteron radioaktif. Ini adalahpuncak immunoreactive utama.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

Assay Metode
Estradiol
Untuk menganalisis ekstrak kotoran dari burung enggang perempuan, sebuah RIA estradiol yang digunakan sebagai
dijelaskan sebelumnya [Medler dan Lance, 1998]. Uji estradiol adalah
modifikasi dari 125I assay kit (Diagnostik Produk Corp, Los Angeles, CA).
Dua mikroliter ekstrak kotoran dilarutkan dikombinasikan dengan estradiol
antiserum, diikuti dengan inkubasi 2-jam pada suhu kamar. kemudian ditambahkan dan sampel diinkubasi selama satu jam pada suhu kamar. Penambahan 0,5 ml larutan dekstran arang dese mengakhiri kompetitif reaksi dengan memisahkan terikat dari hormon gratis. Setelah inkubasi 10-min, yang sampel disentrifugasi selama 15 menit pada suhu kamar di 1.500 g. Kemudian 700 ml supernatan yang dipipet ke 12 75 mm tabung reaksi, dan dihitung dalam gamma? counter. ekstrak tinja yang encer serial (0-1: 256) dan dianalisis dalam uji estradiol menghasilkan paralel kurva ke estradiol yang standar (r¼0.9755). The Koefisien intra-assay variasi adalah 9% dan 10% pada 20% dan 70% mengikat (n¼18 dan 20), masing-masing. Koefisien interassay variasi adalah 20% untuk ketiga kontrol yang disediakan. Sensitivitas uji dihitung pada 1,29 pg / tabung. kromatografi cair bertekanan tinggi (HPLC) pemisahan ekstrak fecal mengungkapkan radioaktif elusi estradiol-17-beta lebih polar dengan dua tabung (2 menit) dari puncak immunoreactive. Struktur yang tepat dari estrogen ini senyawa tidak diidentifikasi lebih lanjut. Testosteron Testosteron (T) RIA dijalankan pada sampel dari semua burung studi (laki-laki dan perempuan). Lima puluh mikroliter ekstrak kotoran diuji untuk masing-masing enggang jantan sampel. Untuk T RIA, antisera (diproduksi terhadap testosteron 19-carboxymethylether, ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) dikombinasikan dengan 10.000 cpm H3-T (ICN Biomedicals). The reaktivitas silang dari antisera dalam pengujian ini adalah: testosteron 100%, 5a-dihydrotestosterone 18,75%, 5a-androstane-3a, 17b-diol 3,00%, 5- androstene-3b, 17b-diol 1,00%; semua orang lain yang diuji adalah o1.00%. Setelah semalam inkubasi pada 41C, reaksi kompetitif dihentikan dengan penambahan 0,5 ml larutan dekstran arang. Setelah inkubasi 30-menit pada 41C, sampel disentrifugasi selama 15 menit (41C), dan tertuang dalam botol kilau. Kilau cairan (5 ml) ditambahkan ke masing-masing botol dan dihitung selama 2 menit di Beckman cair kilau spektrometer. Prosedur yang sama diikuti untuk perempuan ' sampel, kecuali bahwa 100 ml ekstrak kotoran diuji untuk memperhitungkan mereka yang lebih rendah kadar testosteron basal. ekstrak tinja yang serial diencerkan dan dianalisis dalam uji tersebut memberikan kurva perpindahan sejajar dengan kurva standar testosteron (r¼0.992). The intra- koefisien variasi adalah 8% dan 6% pada 20% dan 70% mengikat (n¼7 dan 7), masing-masing. Koefisien interassay variasi adalah 14% untuk 82 ng / tabung dan 11% untuk 49 ng / tabung. Sensitivitas dihitung di 8.11 pg / tabung. pemisahan HPLC dari ekstrak tinja menunjukkan immunoreactivity antibodi konsisten dengan elusi penanda testosteron radioaktif. Ini adalah puncak immunoreactive utama.