2.7. SDS-PAGE and Western Blot Dete

2.7. SDS-PAGE and Western Blot Determination

Recombinant OMPw was separated using 10% SDS-
PAGE gel by electrophoreses system at 50v for 3h. In
order to visible the separated bands, gels were stained
with coomassie brilliant blue R.250 (Sigma). For western
blotting, the separated bands of SDS-PAGE were
transferred onto nitrocellulose membranes for 1h at
100v or at 15v for over night using a Trans-blot apparat
us (Bio Rad). After that nitrocellulose membrane were incubated
with 5% BSA (sigma) for 30 min at room temperature,
treated with 1/100 purified mouse monoclonal antibodies
and incubated for 1h. Then, Horseradish Peroxidase labeled (HRP) goat anti mouse IgG antibody (Sigma) was added and incubation was continued for further
1h and specific bands were visualized by respective
substrate in usual manner. Low and high molecular
weight markers standard were developed using
coomassie brilliant blue R.250 staining.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

2.7. SDS-halaman dan Western menghapus penetapanOMPw rekombinan terpisah menggunakan 10% SDS-Halaman gel oleh electrophoreses sistem di 50v selama 3 jam. Dalamagar terlihat band-band yang terpisah, gel yang diwarnaidengan coomassie brilian biru R.250 (Sigma). Untuk westernblotting, band-band yang terpisah dari SDS-halaman yangditransfer ke nitrocellulose membran untuk 1h di100V atau 15v untuk semalaman menggunakan apparat Trans-blotkami (Bio Rad). Setelah membran nitrocellulose yang diinkubasidengan 5% BSA (sigma) selama 30 menit pada suhu kamar,diperlakukan dengan antibodi monoklonal 1/100 dimurnikan mouse dan diinkubasi untuk 1h. Kemudian, lobak peroksidase berlabel kambing (HRP) anti antibodi IgG mouse (Sigma) ditambahkan dan inkubasi dilanjutkan untuk lebih lanjut1h dan spesifik band Divisualisasikan oleh masing-masingsubstrat secara biasa. Rendah dan tinggi molekulertanda-tanda berat standar ini dikembangkan dengan menggunakancoomassie brilian biru R.250 pewarnaan.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

2.7. SDS-PAGE dan Western Blot Penentuan rekombinan OMPw dipisahkan menggunakan 10% SDS- HALAMAN gel dengan sistem elektroforesis pada 50v untuk 3 jam. Dalam rangka untuk terlihat band yang terpisah, gel diwarnai dengan Coomassie R.250 biru cerah (Sigma). Untuk barat blotting, band dipisahkan dari SDS-PAGE yang ditransfer ke membran nitroselulosa untuk 1h di 100V atau 15V selama lebih dari malam menggunakan Trans-blot Apparat kami (Bio Rad). Setelah itu membran nitroselulosa diinkubasi dengan 5% BSA (sigma) selama 30 menit pada suhu kamar, diperlakukan dengan 1/100 dimurnikan antibodi monoklonal tikus dan diinkubasi selama 1 jam. Kemudian, lobak Peroxidase berlabel (HRP) kambing IgG anti tikus antibodi (Sigma) ditambahkan dan inkubasi dilanjutkan selama lebih 1h dan band tertentu divisualisasikan oleh masing-masing substrat dengan cara biasa. Molekul rendah dan tinggi penanda berat standar yang dikembangkan menggunakan Coomassie brilian R.250 biru pewarnaan.