Konvensional, Biokimia Metode, seperti barat, lap has digunakan untuk review mengukur stoikiometri fosforilasi. Phosphopro teins Dan non-phosphoproteins dipisahkan Fisik through sodium lauryl sulfate poliakrilamida elektroforesis gel, Dan mereka Jangka Waktu diperkirakan using Antibodi (11, 12). Metode Penyanyi memakan Waktu Dan memerlukan fosforilasi diinduksi Migrasi Perbedaan hearts gel. Fosforilasi protein stoikiometri also can be diukur Oleh massa Gas-Spektrometri (9, 13, 14). Such as inviting participation, label bebas pendekatan using, stoikiometri can be diukur Dari rasioPDB ion sinyal Dari phosphopeptides Dan Yang Sesuai non-phosphopeptides 14-17 (). SEBUAH asumsi Dari Metode Penyanyi Adalah bahwa Perbedaan ionisasi Dan pendeteksian Efisiensi Yang peptida ini terfosforilasi Dan nonphosphorylated Formulir can be diabaikan. Untuk review Mengatasi kekurangan Penyanyi, Yang terakhir di dilaporkan Metode (18) has digunakan untuk review menentukan tanggapan rasioPDB phosphopeptides Dan non-phosphopeptides sintetis using peptida standar, protein Dan untuk review mengukur stoichiometries Dari doa tirosin Tampak Masih memiliki Sisa di Lyn.
Massa berbasis spektrometri Metode berbaring, mengistilahkan kuantifikasi absolut (AQUA) (13), didasarkan PADA dilusi-isotop stabil. Berat versi terfosforilasi Dan non-terfosforilasi Peptida Adalah Buatan Dan dibubuhi Ke hearts Jangka Waktu sampel di dikenal sebagai standar internal. The fosforilasi stoikiometri can be TIMAH DENGAN mengukur Dan membandingkan absolut Yang Melimpah peptida SETIAP ini terfosforilasi Dan nonphosphorylated Formulir. Khususnya, using Metode Penyanyi, kami has menunjukkan bahwa Ser1526 Dari Manusia separase dipertahankan PADA POSISI dihuni Sampai metafase-ke-anafase Transisi ketika sebagian dephosphorylated Dan diaktifkan, sehingga Pembebasan Terikat Saudara kromatid. Mengetahui Yang stoikiometri Dari Ser1526 di Seluruh SIKLUS sel Terbukti Penting untuk review Memahami KHUSUS Yang mitosis fungsi fungsi (19). Selain separase, Metode Penyanyi has beradaptasi untuk review mengukur Asing di Akt (20).
Sedang diterjemahkan, harap tunggu..
