MATERIALS AND METHODS Materials Gre

MATERIALS AND METHODS
Materials
Green coffee beans (Coffea arabicavariety Mundo Novo) were supplied by the Instituto Agronômico de Campinas (Campinas, Brazil). The beans were frozen using liquid nitrogen and ground in a manual mill to avoid oil losses. Ground beans were immediately classified by particle size using a sieve series, and then stored in sealed plastic bags and kept in a freezer until use. The total oil content in this ground material was obtained by gravimetry after hexane extraction in a Sohxlet apparatus. Before each experiment the ground coffee beans were dried in an oven at 65ºC during 24h to reduce sample moisture. This limit of temperature was adopted to avoid the oxidation of the coffee oil. Carbon dioxide (99.9%) and carbon dioxide, ethanol or isopropyl alcohol mixtures (5% wt/wt) were
purchased from White Martins Co. (Campinas, Brazil). Methanol and ethanol, acetone and
acetonitrile in HPLC grade (Merck, Rio de Janeiro, Brazil) were purchased from a local supplier.
Experimental Apparatus A semi-continuous flow experimental apparatus (Fig. 1) that allows an independent control of temperature and pressure was used for the extraction experiments. The apparatus was designed and assembled by LEPPBIO/FEQ/UNICAMP supercritical fluid process research group for pressures up to 41.3 MPa at 200ºC. The major components of this apparatus included positive liquid displacement pumps (P-1, P-2) (Thermal Separation Products, Riveira Beach, FL, USA) for
solvent delivery (46-460 mL/hr), one 300 mL highpressure extraction vessel ( E-1) (Autoclave
Engineers, Erie, PA, USA) and two high-pressure columns (C-1, C-2) (300 mm X 12,7 mm I.D.) and
separator flasks. The extraction vessel and the columns were supplied with heating jackets and
temperature controllers and could be operated in series with three different arrangements. Heating
tapes were used throughout the apparatus to maintain constant temperature in the entire equipment. In order to ensure constant and steady solvent delivery, pump heads were cooled circulating fluid through a chiller, CFT R134a (NESLAB Instruments, Newington, NH, USA). Flow rates and accumulated
gas volumes passing through the apparatus were measured using a flow computer measuring device
(FM-1) (EG&G Instr. Flow Technology, Farmington Hills, Michigan, USA). Micrometering valves VM-1
(Autoclave Engineers, Erie-Pennsylvania, USA) were used for flow control throughout the apparatus.
Heating tapes were also used around these valves to prevent freezing of solvents or solid solute
precipitation following depressurization. Behind those valves three flasks were positioned in series to
collect the solute after depressurization. The pressure in the extractor and columns was indicated by a
digital transducer system (G1, G2, G3), Heise Series 901A RTS, acquired from Dresser Industries
(Stratford, CT, USA) with +0.03 MPa of precision. Extractor and column temperatures were controlled
within +0.5o C of precision. The compositions of the coffee extract fractions were determined by HPLC using a LC-10AD chromatograph (Shimadzu, Kyoto, Japan) and a C18 column (25 cm x 4.6 mm, 5µm, Supelco, USA). For the determination of the oil content in the extracts the mobile phase used was acetone/acetonitrile (62:38% v/v) and the flow rate was 1.0 ml/min (González et a., 2001). A refractive index detector model RID 10A (Shimadzu, Kyoto, Japan) was used and the peaks were identified by comparison with pure standards (GC grade, >99%, Sigma, St Louis, USA) and chromatographic profiles presented in the literature (González et a., 2001). The amounts of caffeine and chlorogenic acids in the extracts were determined using a detector SPD 10 AV (Shimadzu, Kyoto, Japan) operating at 280 and 313 nm respectively. Methanol (50% v/v) and (40% v/v) in aqueous sodium acetate (0.5%) at a flow rate of 0.8 ml/min was used as the mobile phase.

Experimental Procedures
In order to explore the capacity of CO2and CO2-aliphatic alcohol mixed solvents in the extraction of
caffeine, coffee oil and chlorogenic acids from green coffee beans, experiments were carried out at 50ºC and 60ºC and pressures of 15.2, 24.8 and 35.2 MPa. Solvent mass flow rate was kept at 1.8 g/min. At this flow rate it can be assumed that equilibrium concentration for the solvent and solute is achieved (Filippi, 1982; Mohamed et al. 2000; Azevedo et al., 2003). Samples of 15 g of dried ground green coffee beans (average diameter of 0.725 mm) were placed in the extractor. In a typical extraction experiment, solvent (CO2or CO2-alcohol mixed solvents) was delivered by the pumps as a liquid and slowly allowed into the extractor until the desired extraction pressure was reached. The extractor was heated until the extraction temperature and the micrometering valve positioned downstream of the extractor was slowly opened while maintaining the pressure constant in the extractor. The effluents of the extractor (supercritical fluid and the extracted components) were depressurized through the
micrometering valve. The precipitated extract following depressurization was recovered in the
separator flasks immersed in a cooling bath. Ethanol was placed in the last separator flask to assure
complete recovery of precipitated coffee extract. In these particular experiments,fractions were collected at time intervals characterized by the passage through the extractor of 183 and 91.5 g of CO2 and, CO2-alcohol mixed solvents, respectively. The amount of solvent was determined through the gas
flowmeter. In order to estimate the oil extraction yield, the total oil content of the coffee beans was obtained by gravimetry after benzene extraction in a Sohxlet apparatus.

Hasil (Bahasa Indonesia) 1:

BAHAN DAN METODE Bahan Biji kopi hijau (Coffea arabicavariety Mundo Novo) yang disediakan oleh Instituto Agronômico de Campinas (Campinas, Brasil). Kacang beku menggunakan nitrogen cair dan tanah di sebuah pabrik manual untuk menghindari kerugian minyak. Kacang tanah segera diklasifikasikan oleh ukuran partikel yang menggunakan serangkaian saringan, dan kemudian disimpan dalam kantong plastik tertutup dan disimpan di freezer sampai digunakan. Minyak total konten dalam bahan tanah ini diperoleh dengan Gravimetri setelah heksana ekstraksi dalam alat Sohxlet. Sebelum setiap percobaan biji kopi tanah dikeringkan dalam oven di 65ºC selama 24 jam untuk mengurangi kelembaban sampel. Batas ini suhu diadopsi untuk menghindari oksidasi minyak kopi. Karbon dioksida (99,9%) dan karbon dioksida, etanol, atau isopropil alkohol campuran (5% wt/wt) dibeli dari putih Martins Co (Campinas, Brasil). Metanol dan etanol, aseton dan asetonitril HPLC kelas (Merck, Rio de Janeiro, Brasil) dibeli dari pemasok lokal. Eksperimental peralatan A semi-kontinyu eksperimental aparat aliran (Fig. 1) yang memungkinkan independen kontrol suhu dan tekanan digunakan untuk percobaan ekstraksi. Peralatan dirancang dan dirakit oleh kelompok riset superkritis cairan proses LEPPBIO/FEQ/UNICAMP untuk tekanan hingga 41.3 MPa pada 200ºC. Komponen utama dari aparat ini termasuk pompa perpindahan positif cair (P-1, P-2) (termal pemisahan produk, Riveira Beach, FL, Amerika Serikat) untuk pelarut pengiriman (46-460 mL/jam), 300 mL satu highpressure ekstraksi kapal (E-1) (Autoclave Insinyur, Erie, PA, Amerika Serikat) dan dua bertekanan tinggi kolom (C-1, C-2) (300 mm X 12,7 mm id) dan labu pemisah. Kapal ekstraksi dan kolom yang disediakan dengan pemanas jaket dan pengontrol suhu dan dapat dioperasikan dengan tiga susunan yang berbeda. Penghangat Ruangan kaset yang digunakan di seluruh peralatan untuk menjaga suhu konstan di seluruh peralatan. Untuk memastikan pengiriman pelarut yang konstan dan mantap, kepala pompa yang didinginkan beredar cairan melalui chiller, R134a APU (instrumen NESLAB, Newington, NH, USA). Aliran harga dan akumulasi volume gas yang melewati aparat diukur menggunakan komputer mengalir alat pengukur (FM-1) (Misalnya & G teknologi aliran Instr., Farmington Hills, Michigan, USA). Micrometering katup VM-1 (Autoclave insinyur, Erie Pennsylvania, Amerika Serikat) digunakan untuk mengontrol aliran seluruh peralatan. Penghangat Ruangan kaset juga digunakan di sekitar katup ini untuk mencegah pembekuan pelarut atau zat terlarut padat curah hujan yang mengikuti depressurization. Di belakang katup-tiga labu diposisikan dalam seri untuk mengumpulkan zat terlarut setelah depressurization. Tekanan dalam extractor dan kolom dinyatakan oleh transduser digital sistem (G1, G2, G3), Heise seri 901A RTS, Diperoleh dari industri rias (Stratford, CT, USA) dengan +0.03 MPa presisi. Extractor dan kolom suhu dikendalikan dalam + C 0.5o presisi. Komposisi pecahan ekstrak kopi yang ditentukan oleh HPLC menggunakan chromatograph LC-10AD (Shimadzu, Kyoto, Jepang) dan kolom C18 (25 cm x 4.6 mm, 5µm, Supelco, USA). Untuk penentuan minyak konten dalam ekstrak fase mobile yang digunakan adalah aseton/asetonitril (62:38% v/v) dan laju aliran adalah 1,0 ml/min (González et a., 2001). Model detektor indeks bias RID 10A (Shimadzu, Kyoto, Jepang) digunakan dan puncak-puncak yang diidentifikasi dengan perbandingan dengan standar murni (kelas GC, > 99%, Sigma, St Louis, Amerika Serikat) dan profil kromatografi disajikan dalam literatur (González et a., 2001). Jumlah kafein dan klorogenat asam dalam ekstrak bertekad menggunakan detektor SPD 10 AV (Shimadzu, Kyoto, Jepang) beroperasi pada 280 dan 313 nm masing-masing. Metanol (50% v/v) dan (40% v/v) pada larutan natrium asetat (0,5%) pada laju alir dari 0.8 ml/menit digunakan sebagai tahap mobile.Prosedur eksperimental Untuk menjelajahi kapasitas akan menjadi karbondioksida dan CO2-alifatik alkohol campuran pelarut di ekstraksi kafein, kopi minyak dan klorogenat asam dari biji kopi hijau, eksperimen dilaksanakan di 50ºC dan 60ºC dan tekanan MPa 15.2, 24.8 dan 35.2. Laju aliran massa pelarut disimpan di 1.8 g/menit. Kecepatan aliran ini dapat diasumsikan bahwa keseimbangan konsentrasi untuk pelarut dan solut dicapai (Filippi, 1982; Mohamed et al. 2000; Azevedo et al., 2003). Sampel 15 g biji kopi kering tanah hijau (rata-rata diameter 0.725 mm) ditempatkan dalam extractor. Dalam percobaan khas ekstraksi pelarut (CO2or CO2-alkohol campuran pelarut) disampaikan oleh pompa sebagai cairan dan perlahan-lahan diperbolehkan masuk ke extractor sampai tekanan ekstraksi yang diinginkan tercapai. Extractor dipanaskan sampai suhu ekstraksi dan katup micrometering diposisikan hilir extractor perlahan-lahan dibuka sambil mempertahankan tekanan konstan dalam extractor. Limbah extractor (superkritis cairan dan komponen diekstraksi) yang depressurized melalui katup micrometering. Ekstrak precipitated berikut depressurization ditemukan pada pemisah labu terbenam dalam bath pendingin. Etanol ditempatkan di termos pemisah terakhir untuk menjamin pemulihan lengkap precipitated kopi ekstrak. Dalam percobaan ini tertentu, pecahan dikumpulkan pada interval waktu yang ditandai dengan bagian melalui extractor 183 dan 91,5 g CO2 dan, CO2-alkohol campuran pelarut, masing-masing. Jumlah pelarut ditentukan melalui gas Flowmeter. Untuk memperkirakan hasil ekstraksi minyak, kandungan minyak total biji kopi diperoleh dengan Gravimetri setelah benzena ekstraksi dalam alat Sohxlet.

Hasil (Bahasa Indonesia) 2:

BAHAN DAN METODE
Bahan
Hijau biji kopi (Coffea arabicavariety Mundo Novo) yang disediakan oleh Instituto de Agronômico Campinas (Campinas, Brazil). Kacang beku menggunakan nitrogen cair dan tanah di sebuah pabrik pengguna untuk menghindari kerugian minyak. Kacang tanah segera diklasifikasikan berdasarkan ukuran partikel menggunakan serangkaian saringan, dan kemudian disimpan dalam kantong plastik yang tertutup rapat dan disimpan dalam freezer sampai digunakan. Total kandungan minyak dalam bahan tanah ini diperoleh dengan gravimetri setelah ekstraksi heksana dalam alat Sohxlet. Sebelum setiap percobaan biji kopi tanah dikeringkan dalam oven pada 65ºC selama 24 jam untuk mengurangi kelembaban sampel. Ini batas suhu diadopsi untuk menghindari oksidasi minyak kopi. Karbon dioksida (99,9%) dan karbon dioksida, etanol atau isopropil alkohol campuran (5% wt / wt) yang
dibeli dari Putih Martins Co (Campinas, Brazil). Metanol dan etanol, aseton dan
asetonitril di HPLC grade (Merck, Rio de Janeiro, Brasil) yang dibeli dari pemasok lokal.
Eksperimental Aparatur Aliran peralatan eksperimen semi-kontinyu (Gambar. 1) yang memungkinkan kontrol independen suhu dan tekanan adalah digunakan untuk percobaan ekstraksi. Peralatan ini dirancang dan dirakit oleh LEPPBIO / feq / UNICAMP kelompok riset proses fluida superkritis untuk tekanan sampai 41,3 MPa pada 200 º C.. Komponen utama dari alat ini termasuk perpindahan cairan positif pompa (P-1, P-2) (Pemisahan Thermal Produk, Riveira Beach, FL, USA) untuk
pengiriman pelarut (46-460 mL / jam), satu 300 kapal ekstraksi tinggipompa tekanan mL (E-1) (Autoclave
Engineers, Erie, PA, USA) dan dua kolom tekanan tinggi (C-1, C-2) (300 mm X 12,7 mm ID) dan
termos pemisah. Kapal ekstraksi dan kolom yang disediakan dengan jaket pemanas dan
pengendali suhu dan bisa dioperasikan secara seri dengan tiga pengaturan yang berbeda. Pemanasan
kaset yang digunakan di seluruh aparat untuk menjaga suhu konstan di seluruh peralatan. Untuk memastikan pengiriman pelarut konstan dan stabil, kepala pompa didinginkan beredar cairan melalui chiller, CFT R134a (NESLAB Instrumen, Newington, NH, USA). Laju aliran dan akumulasi
volume gas melewati aparat diukur dengan menggunakan alat pengukur komputer aliran
(-FM 1) (EG & G Instr. Teknologi Flow, Farmington Hills, Michigan, USA). Katup Micrometering VM-1
(Autoclave Engineers, Erie-Pennsylvania, USA) digunakan untuk kontrol aliran seluruh aparatur.
kaset Pemanasan juga digunakan di seluruh katup ini untuk mencegah pembekuan pelarut atau zat terlarut padat
curah hujan berikut depressurization. Di balik katup tiga termos diposisikan dalam seri untuk
mengumpulkan zat terlarut setelah depressurization. Tekanan dalam ekstraktor dan kolom yang ditandai dengan
sistem transduser digital (G1, G2, G3), Heise Seri 901A RTS, diperoleh dari Dresser Industries
(Stratford, CT, USA) dengan 0,03 MPa presisi. Extractor dan kolom suhu dikendalikan
dalam + 0.5o C presisi. Komposisi fraksi ekstrak kopi ditentukan oleh HPLC menggunakan kromatografi LC-10AD (Shimadzu, Kyoto, Jepang) dan kolom C18 (25 cm x 4,6 mm, 5μm, Supelco, USA). Untuk penentuan kandungan minyak dalam ekstrak fase gerak yang digunakan adalah aseton / asetonitril (62: 38% v / v) dan kecepatan aliran adalah 1,0 ml / menit (González et a, 2001.). Sebuah bias Model detektor indeks RID 10A (Shimadzu, Kyoto, Jepang) adalah digunakan dan puncak diidentifikasi dibandingkan dengan standar murni (GC kelas,> 99%, Sigma, St Louis, USA) dan profil kromatografi disajikan dalam literatur (González et a., 2001). Jumlah kafein dan asam chlorogenic dalam ekstrak ditentukan menggunakan detektor SPD 10 AV (Shimadzu, Kyoto, Jepang) yang beroperasi pada 280 dan 313 nm. Metanol (50% v / v) dan (40% v / v) dalam larutan natrium asetat (0,5%) pada laju alir 0,8 ml / menit digunakan sebagai fase gerak. Prosedur Eksperimental Untuk mengeksplorasi kapasitas CO2and CO2-alifatik alkohol pelarut campuran dalam ekstraksi kafein, minyak kopi dan asam chlorogenic dari biji kopi hijau, percobaan dilakukan pada 50ºC dan 60ºC dan tekanan dari 15,2, 24,8 dan 35,2 MPa. Laju aliran massa pelarut disimpan di 1,8 g / min. Pada laju aliran ini dapat diasumsikan bahwa konsentrasi kesetimbangan untuk pelarut dan zat terlarut dicapai (Filippi, 1982; Mohamed et al, 2000;. Azevedo et al, 2003.). Sampel dari 15 g tanah kering biji kopi hijau (diameter rata-rata 0.725 mm) ditempatkan di extractor. Dalam sebuah percobaan ekstraksi khas, pelarut (CO2or CO2-alkohol pelarut campuran) disampaikan oleh pompa sebagai cair dan perlahan diizinkan masuk ke ekstraktor sampai tekanan ekstraksi yang diinginkan tercapai. Extractor itu dipanaskan sampai suhu ekstraksi dan katup micrometering posisi hilir ekstraktor perlahan-lahan dibuka dengan tetap menjaga tekanan konstan dalam ekstraktor. Para limbah dari ekstraktor (fluida superkritis dan komponen diekstraksi) yang tekanannya melalui katup micrometering. Ekstrak diendapkan berikut depressurization pulih dalam termos pemisah direndam dalam bak pendingin. Etanol ditempatkan dalam labu pemisah terakhir untuk memastikan pemulihan lengkap ekstrak kopi endapan. Dalam percobaan tertentu, fraksi dikumpulkan pada interval waktu yang ditandai dengan bagian melalui ekstraktor dari 183 dan 91,5 g CO2 dan, CO2-alkohol pelarut campuran, masing-masing. Jumlah pelarut ditentukan melalui gas flowmeter. Dalam rangka untuk memperkirakan hasil ekstraksi minyak, kandungan minyak total biji kopi diperoleh dengan gravimetri setelah ekstraksi benzene dalam alat Sohxlet.