Meskipun kromosom berbeda dalam panjang dan jumlah antara
spesies, studi sitogenetik telah menunjukkan bahwa mereka semua berperilaku
sama pada saat pembelahan sel. Selain itu, setiap kromosom eukariotik harus mengandung tiga unsur fungsional dalam
rangka untuk meniru dan memisahkan dengan benar: (1) replikasi originsat yang polimerase DNA dan protein lain memulai
sintesis DNA (lihat Gambar 4-34 dan 4-36), (2) sentromer , dan (3) dua ujung, atau telomere. Studi transformasi ragi digambarkan pada Gambar 10-32 menunjukkan
fungsi dari tiga unsur kromosom ini dan mendirikan pentingnya mereka untuk fungsi kromosom.
Seperti yang dibahas dalam Bab 4, replikasi DNA dimulai
dari situs yang tersebar di seluruh kromosom eukariotik. Ragi genom mengandung banyak urutan ≈100-bp,
yang disebut otonom mereplikasi urutan (ARSS), yang bertindak
sebagai asal replikasi. Pengamatan bahwa penyisipan sebuah
ARS menjadi plasmid melingkar memungkinkan plasmid untuk mereplikasi di
sel ragi yang disediakan identifikasi fungsional pertama urutan asal DNA eukariotik (lihat Gambar 10-32a) .Bahkan meskipun melingkar ARS mengandung plasmid dapat bereplikasi dalam sel ragi , hanya sekitar 5-20 persen dari sel-sel progeni
mengandung plasmid karena mitosis pemisahan plasmid rusak. Namun, plasmid yang juga membawa urutan CEN, berasal dari sentromer kromosom ragi,
memisahkan sama atau hampir jadi bagi ibu dan anak
sel selama mitosis (lihat Gambar 10-32b).
Jika plasmid melingkar mengandung ARS dan CEN urutan dipotong sekali dengan enzim restriksi, yang dihasilkan
plasmid linier tidak menghasilkan LEU koloni kecuali mereka
mengandung telomeric (TEL) urutan khusus diikat ke mereka
berakhir (lihat Gambar 10-32c). Percobaan pertama yang berhasil melibatkan transfeksi sel ragi dengan plasmid linier yang
dicapai dengan menggunakan ujung molekul DNA yang
dikenal untuk meniru sebagai molekul linear di bersilia protozoa Tetrahymena.During bagian dari siklus hidup Tetrahymena, banyak nuklir DNA berulang kali disalin singkatnya
potongan untuk membentuk apa yang disebut macronucleus. Salah satunya fragmen berulang diidentifikasi sebagai dimer dari ribosom
DNA, ujung yang berisi urutan berulang
(G4T2) n. Ketika bagian dari urutan TEL berulang ini
diikat ke ujung plasmid ragi linear mengandung ARS
dan CEN, replikasi dan pemisahan yang baik dari linear
plasmid terjadi
Sedang diterjemahkan, harap tunggu..
